5-FC对CD基因修饰的SHG-44恶性人脑胶质瘤细胞凋亡诱导作用的研究

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背景与目的:脑胶质瘤是颅内最常见的恶性肿瘤,尽管近年来在手术、放疗、化疗和免疫治疗等方面已取得很大进展,但疗效仍不乐观,5年生存率不足50%。随着分子生物学的发展和基因工程技术的进步,使基因治疗胶质瘤成为可能,而自杀基因治疗是其中的一种重要方法。经典自杀基因一般编码非哺乳动物酶类,可将无毒的前药转变为高毒性代谢产物。因此,全身使用无毒性前药可导致肿瘤部位毒性药物产生并发挥抗肿瘤效应。胞嘧啶脱氨酶(CD)仅存在于酵母或细菌体内,哺乳动物细胞内不含该酶,它可将抗真菌药物5-氟胞嘧啶(5-FC)转变为抗肿瘤药物5-氟尿嘧啶(5-FU)。本研究在离体状态下将CD基因转染SHG-44恶性人脑胶质瘤细胞,建立CD/5-FC自杀基因系统;进而通过体外试验探讨CD/5-FC系统能否抑制恶性人脑胶质瘤细胞的生长及其作用机理,以期为CD/5-FC系统在体治疗胶质瘤试验打下基础,为该治疗系统尽快步入临床提供实验资料。 方法:1.将所获取的pCMVCD表达质粒扩增并抽提纯化,限制性内切酶Bam HI和Not I酶切鉴定pCMVCD质粒。分别以SP6与T7启动子进行CD基因测序。2.SHG-44细胞在含
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