愈创营养油促进大鼠皮肤缺损创面愈合的实验研究

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目的观察愈创营养油促进大鼠皮肤缺损创面修复情况,探讨愈创营养油促进大鼠皮肤缺损创面修复和抑制瘢痕形成的机理。方法1.愈创营养油制备:①蛋黄油的制备:熟蛋黄,除去水分,煎枯出油,备用。②脂肪组织提取液制备:雄性4月龄健康猪、牛、羊各1只,切取背部脂肪组织,灭菌0.01mol/L磷酸盐缓冲液(PBS,pH7.2)进行10倍稀释,冰浴匀浆,1000r/min离心5min,吸取上清液微孔滤膜过滤除菌,20℃冻存。③麻油加热精炼过滤。将麻油、蛋黄油按10:1比例;猪、牛、羊提取物按3:3:5比例加入油中,检测性状、渗透压及pH值。2.实验动物来源:普通级大鼠由辽宁医学院动物实验中心提供。3.造模:45只大鼠背部各造成两个开放性全厚皮缺损创面,直径为3cm,深达肌层。4.处置方法:45只大鼠随机分为三组,即空白对照组(A组):外敷生理盐水;VEGF外敷组(B组):大鼠的创面上敷含有40ng VEGF的明胶海绵;愈创营养油组(C组):涂抹愈创营养油约1mm厚,无菌敷料包扎创面。通过整体和创面局部观察(包括创面愈合时间、创面愈合率、各组上皮生长宽度、造模后28天瘢痕面积比较)、组织学观察(包括胶原纤维体积、微血管计数、电镜下细胞超微结构的观察)、免疫组化法检测CDK4和RT-PCR方法检测VEGFmRNA来观察各组大鼠创面愈合和瘢痕形成情况。结果1.一般情况45只大鼠全部成活,各组大鼠创面仅有少许血性渗出斑,无明显感染迹象,创面、消化道及泌尿道排泄物均未见出血。2.愈创营养油组愈合时间最短,上皮生长最快,愈后瘢痕面积最小,优于另外两组,VEGF组、愈创营养油组与空白对照组比较有显著性差异,(p<0.01),愈创营养油组与VEGF组比较有显著性差异,说明愈创营养油比VEGF组有更明显的促进创面愈合的作用。3.术后3d空白对照组胶原纤维体积值很低,VEGF组与空白对照组比较p<0.05,而愈创营养油组与空白对照组比较p<0.01,说明愈创营养油组在伤后早期就能促进胶原的产生,以缩短封闭创口时间;术后7d愈创营养油组数值比其他两组增高更快,而到了14d愈创营养油组数值与其他两组相比没有统计学意义,说明在愈合后期,愈创营养油组胶原纤维产生的数量明显减少,从而抑制了胶原纤维的过度增生,也就避免了过多的瘢痕形成。4.伤后3d开始,创面中心的血管内皮细胞数目开始增加,至伤后7d达到高峰,此后逐渐下降,至伤后14d明显下降,愈创营养油组7d毛细血管截面面数密度对照组相比有非常显著性差异(p<0.01),说明7d是毛细血管形成高峰期。5.愈创营养油组中CDK4及CD31的表达最明显,VEGF组次之,空白对照组最弱。在3、7、14d三个不同的时间点三组之间均有明显差异,P<0.05,从分子水平说明愈创营养油能促进血管的发生、增殖从而促进创面愈合。6.VEGFmRNA表达在3d和7d时各组间有明显差异,而在14d时组间基本无差别。且于7d时愈创营养油组的VEGFmRNA表达为高峰期。表说明愈创营养油组有较强的调VEGFmRNA表达的作用。术后14d时各组在VEGFmRNA的表达量各组之间已无明显差异,说明在肉芽修复的后期,修复趋于完成,各组间VEGFmRNA的表达也趋于平衡。因此可证明大鼠皮肤再生过程中外敷愈创营养油确能促进肉芽组织中VEGFmRNA的表达。结论1.愈创营养油主要在伤后早期促进肉芽组织毛细血管增生,产生较多的胶原纤维以便加快创面愈合。2.愈创营养油通过促进创面愈合和上皮化,从而抑制皮肤缺损创面修复后期胶原纤维的增殖来减少瘢痕形成。3.其机制可能是:愈创营养油促进了皮肽缺损伤时毛囊、皮脂腺、血管内皮等细胞的增殖,而加速创面愈合的;愈创营养油通过促进创面愈合和创面细胞上皮化减少瘢痕的。
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