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目的:p53是重要的抑癌基因之一。新发现的ASPP (Apoptosis stimulating protein of p53 )家族是能特异性地调节p53抑癌功能的蛋白质。其中iASPP(inhibitory member of the ASPP family)与p53结合能干扰p53的细胞凋亡能力,因此是p53的重要抑制蛋白。本次实验利用RT-PCR方法检测ASPP基因家族mRNA在三种白血病细胞株的表达水平,揭示ASPP基因家族mRNA的表达量与白血病细胞的发生发展的关系,同时通过构建全长iASPP基因的siRNA (small interfere RNA)真核表达载体,并将其通过脂质体转染到白血病细胞株中,经过流式细胞仪检测细胞凋亡及RT-PCR、Western Blot方法检测观察阳性干扰质粒对iASPP基因的沉默作用,探讨应用RNA干扰调控p53的可能性,探索促进肿瘤治疗的新策略,为进一步实验提供技术手段。方法:1.白血病细胞株HL-60、Jurkat、Molt-4在加有100U/ml青霉素、100U/ml链霉素,10%小牛血清的RPMI 1640培养基,5%CO2条件下37 oC培养。2.应用RT-PCR检测ASPP基因家族mRNA在各细胞株中的表达情况。3.根据GenBank中iASPP的序列,设计特异性siRNA序列,将模板序列克隆至PGCsilencerTM H1/Neo/GFP质粒中,并测序鉴定。4.用脂质体将测序正确的重组子转染至白血病细胞株HL-60、Jurkat、Molt-4中,用RT-PCR、Western Blot方法检测iASPP的表达以及用流式细胞仪检测细胞凋亡的变化状况。结果:1.ASPP基因家族mRNA在各白血病细胞株中均有表达,但其在各细胞株中的表达量有差异。2.在所检测的白血病细胞中,ASPP1基因mRNA的表达量低于正常人外周血淋巴细胞的表达量。ASPP2基因mRNA的表达量在不同的细胞株中表达差异较大,与正常人外周血淋巴细胞的表达量相比呈下降趋势。iASPP基因mRNA在白血病细胞株中的表达量均高于正常人外周血淋巴细胞的表达量。