【摘 要】
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目的:探讨LUCAT1与Beclin1的关系及其在调控肺腺癌A549干细胞干性中的作用。方法:1.通过无血清悬浮培养法富集肺腺癌A549干细胞,采用FCM检测CD44+和CD133+标记细胞比例。2.采用克隆形成实验、Transwell迁移侵袭实验检测A549-MN及A549-SC的生物学功能。3.通过qRT-PCR、WB和TEM观察A549-MN及A549-SC的干性及自噬水平。4.观察敲低或过
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目的:探讨LUCAT1与Beclin1的关系及其在调控肺腺癌A549干细胞干性中的作用。方法:1.通过无血清悬浮培养法富集肺腺癌A549干细胞,采用FCM检测CD44~+和CD133~+标记细胞比例。2.采用克隆形成实验、Transwell迁移侵袭实验检测A549-MN及A549-SC的生物学功能。3.通过qRT-PCR、WB和TEM观察A549-MN及A549-SC的干性及自噬水平。4.观察敲低或过表达Beclin1后A549-SC的自噬泡数量变化、功能变化及干性变化。5.通过基因芯片技术对A549-MN和A549-SC之间差异表达的LncRNA进行大规模筛选并采用qRT-PCR验证。6.检测敲低或过表达LUCAT1后A549-SC的Beclin1表达量及生物学功能变化。7.采用qRT-PCR及WB检测敲低或过表达LUCAT1后A549-SC的自噬及干性水平。结果:1.A549-SC中CD44~+和CD133~+标记细胞率(13.77±2.43%)高于A549-MN(1.50±0.24%)(P<0.01)。2.A549-SC的克隆形成数、迁移细胞数及侵袭细胞数较A549-MN增多(P<0.05)。3.A549-SC中干性相关基因(Nanog、Bmi1)及自噬相关基因(Beclin1、LC3B)的mRNA及蛋白表达量均较A549-MN增高;自噬相关基因p62的蛋白表达量较A549-MN下降。TEM下观察到A549-SC中自噬泡数量较A549-MN增多(P<0.05)。4.敲低Beclin1减少了A549-SC的自噬泡数量,抑制了A549-SC的增殖、克隆和迁移侵袭能力,同时也降低了A549-SC的干性水平;过表达Beclin1增加了A549-SC的自噬泡数量,促进了A549-SC的增殖、克隆和迁移侵袭能力,同时也提高了A549-SC的干性水平(P<0.05)。5.基因芯片结果及qRT-PCR验证结果显示LUCAT1在A549-SC中表达具有显著差异性(P<0.01)。6.敲低LUCAT1后Beclin1的表达量下降,过表达LUCAT1后Beclin1的表达量上调。同时,敲低LUCAT1抑制了A549-SC的增殖、克隆、迁移侵袭功能,减少了A549-SC的自噬泡数量;过表达LUCAT1促进其增殖、克隆和迁移侵袭功能,增加了A549-SC的自噬泡数量(P<0.05)。7.敲低LUCAT1后A549-SC的自噬及干性水平均下降,过表达LUCAT1后A549-SC的自噬及干性水平均上调(P<0.05)。结论:1.无血清悬浮培养法可富集得到人肺腺癌A549干细胞,其具有干细胞生物特性。2.Beclin1激活自噬参与调控人肺腺癌A549干细胞干性。3.LncRNA-LUCAT1通过上调Beclin1来维持肺腺癌A549干细胞干性,可为肺癌的分子靶向治疗提供新思路。
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