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过去几十年端粒生物学研究成果显示端粒长度和端粒酶活性与细胞的寿命以及人类疾病密切相关.端粒酶是端粒重要的结合蛋白之一,以端粒依赖或不依赖方式在细胞衰老及肿瘤发生发展中发挥重要作用.人类端粒酶活性与其逆转录酶催化亚基(human telomerase reverse transcriptase, hTERT)的表达高度相关,hTERT的表达调控对端粒酶活性的调节起到关键作用.然而,hTERT的调控机理和生物学功能尚不完全明确.人类端粒酶是一个分子量高达2MD的蛋白复合物,但被鉴定的hTERT结合蛋白总分子量远小于2MD,说明大部分端粒酶组分尚未发现.因此,新的hTERT结合蛋白的筛选和鉴定是研究其端粒酶活性和生物学功能的重要基础,对于阐明端粒酶在癌症和衰老相关疾病等发生发展中的分子机理具有重要的科学意义.我们以hTERT氨基酸序列中一段进化保守的端粒酶特有基序T-motif(547-594aa)为"bait",构建hTERT T-motif 的酵母双杂交系统,筛选和鉴定hTERT新的结合蛋白,发现DDRGK家族蛋白DDRGK1 (DDRGK domain-containing protein 1)与hTERT可以相互作用.在人乳腺癌细胞MCF7中,外源表达hTERT和DDRGK1,进行正反免疫共沉淀实验,进一步证实DDRGK1和hTERT可以相互结合：构建Flag标签的hTERT和DDRGK1不同突变体,通过免疫共沉淀实验,进行DDRGK1和hTERT的蛋白互作区域分析,发现hTERT的第567-594氨基酸残基区域是与DDRGK1相互作用所必需的.为鉴定DDRGK1是否调控hTERT端粒酶活性,进行TRAP (Telomeric reapeat amplification protocol)实验,发现在MCF-7和HeLa细胞中过表达DDRGK1显著抑制hTERT端粒酶活性；相反,基因沉默DDRGK1能够促进端粒酶活性.端粒酶活性和hTERT的表达高度相关,因此,hTERT的表达调控对端粒酶活性的调节起到关键作用,主要包括转录和转录后水平的调控.我们通过实时荧光定量PCR (Quantitative Real-time PCR，Q-PCR)和免疫印迹实验,发现在MCF-7细胞中过表达或基因沉默DDRGK1对hTERT信使RNA (mRNA)水平没有明显改变.而过表达DDRGK1后hTERT蛋白水平显著下降,基因沉默DDRGK1后hTERT蛋白水平显著上升DDRGK1很可能通过影响hTERT蛋白稳定性来调控端粒酶活性.研究报导DDRGK1在类泛素化修饰Ufmylation (protein modification by UFM1)中至关重要,而且hTERT、DDRGK1和UFM1 (Ubiquitin-fold modifier 1)在内质网应激中功能上具有高度相关性.因此,构建了Ufmylation修饰系统,为DDRGK1调控端粒酶活性的作用机理和生物学功能的深入研究奠定基础.