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本文研究克隆了人Persephin基因,构建重组Persephin腺病毒,探讨Persephin保护神经干细胞拮抗神经毒素及体外诱导神经干细胞分化的作用,并观察persephin转基因神经干细胞移植治疗PD的作用。
本文用RT-PCR法克隆人PersephincDNA,构建重组Persephin腺病毒载体,并纯化浓缩以获得高滴度可供转染的病毒,为下一步开展关于Persephin的功能研究提供基础。
本文根据PersephincDNA序列设计特异引物,上下游引物的5’端分别引入SalI、XhoI酶切位点及保护碱基,高保真Taq酶作用下用逆转录聚合酶链式反应与同样酶切回收的pAdTrack-CMV连接成pAdTrack-CMV-Persephin,将重组质粒pAdTrack-CMV-Persephin与骨架质粒pAdEasy-1共转染大肠杆菌BJ5183,获得重组腺病毒质粒。
本文揭示了Persephin转基因神经干细胞移植到PD模型脑内,可分化为多巴胺分泌细胞,表达的Persephin可保护残存的多巴胺神经元,促进中脑多巴胺能神经元的生存,预防体内多巴胺能神经元退行性病变,从而提高移植后TH活性,修复PD模型的病理改变,有效地改善帕金森病的病理改变和症状。