蛋白激酶C(protein kinase C,PKC)存在于许多的信号通路当中,在生物体内参与许多生理生化过程,比如细胞生命周期中的生长,分化和凋亡,以及病毒的增殖等等。蛋白激酶C家族包括10个成员共由9个基因编码。为了研究蛋白激酶C在家蚕细小病毒样病毒(BmPLV)的增殖过程中所起的作用,本文从家蚕中肠中克隆到了一个非典型的蛋白激酶C,并且通过大肠杆菌表达系统进行了原核表达,以及对表达的蛋白进行了纯化,还制备了多克隆抗体,此外,还以感染BmPLV病毒的感性品种和抗性品种的家蚕幼虫中肠为实验材料,以蛋白质印记法为手段检测了家蚕蛋白激酶C在家蚕感染病毒时的表达。　　 家蚕蛋白激酶C抑制因子在家蚕抗细小病毒样病毒研究中的被发现,蛋白激酶C抑制因子作为激酶抑制因子能特异的抑制蛋白激酶C作用的发挥。本研究对家蚕蛋白激酶C抑制因子进行了克隆,并在原核表达系统中对该基因做了表达分析。取得的研究结果如下:　　 1.家蚕非典型蛋白激酶C的克隆和氨基酸序列特征　　 在家蚕中肠组织中克隆了非典型蛋白激酶C(BmaPKC)。BmaPKC编码586个氨基酸。BmaPKC包括一个N末端调节区域和C末端激酶区域。利用生物信息学进行了染色体定位,预测到BmaPKC基因定位在第3号染色体上。通过在线网站预测其细胞定位,可知其定位在细胞质中。　　 2.家蚕非典型蛋白激酶C原核表达及多克隆抗体的制备　　 将BmaPKC与表达载体pET-30a连接,重组表达质粒pET-30a-BmaPKC转化E.coli BL21,利用IPTG诱导目的蛋白的表达。经过对诱导条件的不断优化,30a-BmaPKC在21℃,加入0.8 mmol／LIPTG的情况下诱导得到的可溶性的带有6个His标签融合蛋白的量最多。通过Western blot和质谱鉴定显示,所表达的蛋白为一个分子量大小为73KD的融合蛋白,这与我们预测的大小相同。此外用30a-BmaPKC融合蛋白免疫新西兰大白兔,获得了30a—BmaPKC的多克隆抗体。　　 3.在感染病毒的家蚕中肠组织中BmaPKC的表达时相　　 通过Western blot检测0,12,24,36,48,60,72小时感染了家蚕细小病毒样病毒的中肠组织中BmaPKC的表达情况,发现随着时间的不断推移非典型蛋白激酶C在家蚕感性品种中的表达量不断提高,而在抗性品种中的表达量略低于感性品种,并且表达量变化也不明显。由此推断,BmaPKC在细小病毒类病毒增殖过程中可能发挥一定的调节作用。　　 4.家蚕蛋白激酶C抑制因子的原核表达　　 在家蚕中肠组织中克隆了蛋白激酶C抑制因子(BmPKCI)。该片段编码128个氨基酸,包含了三联组氨酸(HIT)保守区域,将基因片段BmPKCI与表达载体pET-28a连接,重组表达质粒pET-28a-BmPKCI转化E.coli BL21。　　 利用IPTG诱导目的基因的表达。经SDS-PAGE和Western blot分析显示,在18KD处出现一条特异的蛋白带,与预期的分子量大小相符。