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滑液囊支原体(Mycoplasma synoviae,MS)可以感染鸡和火鸡引起急性或慢性传染病,主要侵害滑液囊和腱鞘,造成关节肿大,引起渗出性滑膜炎、粘液囊炎或腱鞘滑膜炎。该病发展缓慢、病程长,笼养鸡不易被发现,且一旦发病,极难根除;还易发生混合感染,加剧病情,增高死亡率,经常给养鸡生产造成难于弥补的损失。国外已开发出商品化的滑液囊支原体活疫苗和油佐剂灭活疫苗的研究报告。为此,针对我国鸡群滑液囊支原体感染现状,进行了滑液囊支原体灭活疫苗的研制。本实验是在完成鸡滑液囊支原体灭活疫苗(HN01株)实验室研究的基础上,开展的该疫苗生产工艺研究工作。本实验分别从培养基优化、发酵工艺、浓缩条件和灭活工艺研究四个方面开展研究,结果如下:1对改良MS培养基、改良Frey氏培养基、KM2培养基和改良KM2培养基四种培养基的理化指标和培养性能进行对比,将菌种复壮培养1代后,分别接种改良MS培养基、改良Frey氏培养基、KM2培养基和改良KM2培养基进行CCU测定。旨在选取一种制备简便、性价比高、增菌效果好的培养基。结果显示,改良MS培养基在灭菌前后的pH值变化较小、较稳定;接种菌种后,改良MS培养基的活菌浓度达到108-9CCU/ml,增菌效果较好。而且成本低、配制方便,可选为鸡滑液囊支原体灭活疫苗(HN01株)的生产用培养基。2将鸡滑液囊支原体(HN01株)冻干菌种以改良MS液体培养基进行复苏,分别按2%、5%、10%、15%、20%的量接种至改良MS液体培养基中,以纯粹检验和CCU测定结果筛选最适接种量;用5L发酵罐,将溶氧分别自动调节为10%,20%,40%,80%,以纯粹检验和CCU测定结果筛选最适溶氧控制量;将种子接种至5L发酵罐,分别培养12h、16h、20h、24h、28h、32h,无菌取培养菌液,记录取样时的pH并对其进行纯粹检验和CCU测定,研究其最适发酵罐培养曲线;通过在稳定生长期培养过程中以不同次数分别添加总体积的0.1%、0.2%、0.5%的1%精氨酸作为补液继续培养,研究培养过程中补液最适比和补液最适次数,为大规模生产提供培养参数。实验表明,采取接种量为10%,80r/min搅拌转速并间隙通气,控制溶氧在20%左右;采取连续增菌培养工艺,可使鸡滑液囊支原体生长繁殖稳定期延长13～19h,经过发酵罐培养工艺优化,可使鸡滑液囊支原体(HN01株)的培养活菌数达到109.0CCU/ml左右。3将生产的鸡滑液囊支原体(HN01株)菌液分别经截留分子量为100 K孔径的卷式超滤膜10倍超滤浓缩和16000r/min连续离心机10倍离心浓缩,对两种浓缩方法收获的菌液进行灭活后制备疫苗,通过对疫苗的理化性状、安全性和效力检验等的检测结果衡量两种浓缩方法的可行性。经检验,超滤浓缩方法和连续离心沉降方法浓缩的抗原经灭活后制备的鸡滑液囊支原体灭活疫苗(HN01株)均安全、有效,物理性状均一稳定,无显著差异,均适用于疫苗生产企业规模化生产应用。4将鸡滑液囊支原体(HN01株)的抗原原液和抗原浓缩液分别置于无菌容器内,每种抗原分三组,分别按0.1%、0.3%、0.5%的量加入10%的甲醛溶液(用灭菌生理盐水配制成),充分混合后置37℃下灭活,分别于12小时、16小时、20小时、24小时、30小时、36小时逐瓶取样,进行灭活检验。实验结果表明,鸡滑液囊支原体(HN01株)抗原浓缩液用浓度为0.3%的甲醛溶液,37℃作用16小时方可灭活完全。为了确定能彻底灭活抗原,将鸡滑液囊支原体灭活疫苗(HN01株)灭活工艺设定为:按菌液总量的0.3%加入甲醛溶液,置37℃灭活24小时,每隔2小时充分震摇或搅拌一次。