论文部分内容阅读
目的：观察非综合征型唇腭裂易感基因TGFβ3、IRF6、MSX1在小鼠胚胎唇和腭形成时期的表达情况，探索其在腭裂畸形中的作用机制，为后续实验及临床实验提供实验依据。方法：1.建立维甲酸诱导小鼠腭裂模型，在C57BL/6N孕鼠第10个妊娠日(Gestationday,GD),实验组按照100mg/kg体重对孕鼠进行维甲酸一次性灌胃，对照组给予等体积植物油。分别于GD12天、GD13天、GD14天、GD15天，脱颈处死孕鼠，剖宫取胚鼠。2.采用实时荧光定量PCR（quantitative real-time polymerase chain reaction, QRT-PCR）技术和免疫组化的技术方法检测TGFβ3、IRF6、MSX1基因在胚胎GD12天、GD13天、GD14天、GD15天mRNA和蛋白的表达和分布情况。结果：1.mRNA表达：TGFβ3mRNA的表达量，实验组中各组与GD12天相比，其他各组均升高差异有统计学意义（p<0.05），对照组中各组与GD12天相比，其他各组均升高差异有统计学意义（p<0.05）；实验组与对照组相比，实验组均高于对照组，其中GD14天差异有统计学意义（p<0.05）。IRF6mRNA的表达量，实验组中各组与GD12天相比，其他各组均升高差异有统计学意义（p<0.05），对照组中各组与GD12天相比，其他各组均升高差异有统计学意义（p<0.05）；实验组与对照组相比，除GD15天实验组高于对照组外，其他各组均低于对照组，其中GD14天差异有统计学意义（p<0.05）。MSX1mRNA的表达量，实验组中各组与GD12天相比，其他各组均升高差异有统计学意义（p<0.05），对照组中各组与GD12天相比，除GD13天降低，其他各组均升高，差异均无统计学意义；实验组与对照组相比，除GD15天外，实验组均高于对照组，其中GD13天、GD14天差异有统计学意义(p<0.05)。2.蛋白表达：TGFβ3蛋白表达，实验组中各组与GD12天相比，其他各组均升高差异有统计学意义（p<0.05），对照组中各组与GD12天相比，其他各组均升高差异有统计学意义（p<0.05）；实验组与对照组相比，实验组均高于对照组，除GD13天外其他各组均差异有统计学意义(p<0.05)。IRF6蛋白表达：实验组中各组与GD12天相比，其他各组均升高，除GD14天其他各组差异有统计学意义（p<0.05），对照组中各组与GD12天相比，其他各组均升高，除GD15天其他各组差异有统计学意义（p<0.05）。实验组与对照组相比，除GD15天实验组高于对照组外，其他各组均低于相应对照组差异有统计学意义（p<0.05）。MSX1蛋白表达，实验组中各组与GD12天相比，其他各组均升高，除GD15天其他各组差异有统计学意义（p<0.05），对照组中各组与GD12天相比，除GD14天升高差异无统计学意义，其他两组均降低差异有统计学意义（p<0.05）；实验组与对照组相比，实验组均高于对照组，除GD12天其他个组差异有统计学意义（p<0.05）。结论：1.TGFβ3基因mRNA和蛋白表达水平的上调，可能与胚胎时期唇和腭的形成有关。2.IRF6基因mRNA和蛋白在GD12～GD14天的低表达水平，异常调控腭突的生长发育，而导致唇腭裂的发生。3.MSX1基因mRNA和蛋白的高表达水平，异常调控了腭突的生长发育，导致腭裂的发生。