论文部分内容阅读
骨髓来源的抑制性细胞(Myeloid-derived suppressor cells,MDSCs)是机体重要的免疫抑制细胞,其本质上是一群未成熟、生物学功能复杂的细胞,它们具有显著的抑制机体进行免疫应答促进肿瘤细胞免疫逃逸的能力。鉴于MDSCs与肿瘤相关巨噬细胞(Tumor-associated macrophage,TAM)、肿瘤相关中性粒细胞(Tumor-associated neutrophils,TAN)及M1型、M2型巨噬细胞及单核细胞、粒细胞、树突细胞等多种不同髓系来源的细胞具有相互交织的表型特点,导致了至今对其功能与明确表型间的关系不能明确,从而限制了对其发挥作用的分子机制的进一步研究。目的:本研究旨在利用小鼠乳腺癌4T1细胞系移植重建小鼠乳腺癌动物模型来研究在肿瘤重建过程中小鼠脾脏趋化因子受体与Toll样受体(Toll-like receptor.TLR)在小鼠经典MDSCs表型Gr-1和CD11b双阳性细胞中的表达,从而建立小鼠脾脏MDSCs趋化因子受体与Toll样受体表达谱,为进一步分析MDSCs各亚型的功能及分子机制奠定基础。方法:(1)利用原位移植肿瘤的方法构建4T1移植小鼠模型。(2)流式细胞术建立小鼠乳腺癌细胞系4T1趋化因子受体与Toll样受体表达谱。(3)细胞分离与流式细胞术分析脾脏粒细胞表面趋化因子受体和Toll样受体,建立小鼠脾脏粒细胞趋化因子受体与Toll样受体表达谱,多色流式细胞术分析脾脏MDSCs亚型,比较带瘤小鼠与健康对照小鼠脾脏MDSCs不同亚型的差异,确定带瘤小鼠的优势亚群。结果:(1)小鼠移植肿瘤细胞约1周后长出了米粒大小的肿瘤块,2周后,处死部分小鼠,计算脾指数,正常组小鼠脾指数为:6.47±3.06,4T1组小鼠脾指数为:33.1±1.14,t检验分析检验两组数据间的差异性得出:P值为2.24E-7<0.05。根据4周内的测量数据结果,得出肿瘤体积呈S型生长曲线。6周后,解剖小鼠,肿瘤细胞已经转移至肝脏和肺脏。(2)流式细胞结果显示:小鼠乳腺肿瘤4T1细胞系中TLR2、TLR8、CCR5、CCR7、CXCR7阳性细胞所占比率大于50%,其他趋化因子受体和Toll样受体阳性细胞所占比率很低、甚至没有阳性。(3)根据脾脏粒细胞初步分析结果、挑选出了:CCR1、CCR2、CCR6、CCR7、CXCR2、CXCR4、CXCR6、CX3CR1 对脾脏细胞进行多色流式细胞分析.鉴定出带瘤小鼠中CD45+Lin-CD11b+ly6G+ly6C-B7-Hx-CCR1+等28种不同MDSCs亚型。结论:利用原位移植4T1细胞系的方法,成功建立了向肝和肺转移的小鼠乳腺癌模型;利用流式细胞分析术对4T1细胞系表面趋化因子受体和Toll样受体表达进行了鉴定;成功对小鼠脾脏粒细胞表面的趋化因子受体和Toll样受体进行了分析并对脾脏MDSCs亚型进行了初步分型,这一系列实验可以为临床上乳腺肿瘤治疗靶点的选择提供参考。