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噪声作为环境污染的一部分,对人们精神、心理及脏器系统带来不同程度的危害。最严重的是对听觉系统不可逆的损害。研究血管纹损伤分子机制为噪声性聋(NIHL)提供更有效的防治办法。耳蜗外侧壁包括有血管纹(SV)和螺旋韧带(SL),其中血管纹处的血-迷路屏障(BLB)对维持耳蜗内电位(EP)、调控内耳离子和体液平衡等具有重要作用。噪声引起的耳蜗血管纹血-迷路屏障(BLB)损伤是噪声性聋的重要影响因素之一。既往研究发现,血-迷路屏障除包含有微血管内皮细胞(ECs)和基膜(BM)外,还有周细胞(PCs)和血管周围巨噬细胞样黑色素细胞(PVM/Ms)的存在。PVM/Ms分泌色素上皮衍生因子(PEDF),具有抗血管新生、抗氧化、保护血管通透性的作用。血管内皮生长因子A (VEGFA)具有促进血管新生、增加血管通透性的作用。PEDF、VEGFA可通过调节细胞间连接蛋白的表达,调控BLB通透性。ZO-1、VE-Cadherin和Occludin是血管纹BLB中的连接蛋白,在维持BLB稳定性方面具有重要的作用。本实验在成功构建噪声性聋听阈永久性阈移动物模型的基础上,利用免疫荧光染色、耳蜗冰冻切片、血管纹铺片和激光共聚焦纤维成像扫描技术,对噪声暴露前后不同时间点耳蜗血管纹处PVM/Ms分布变化进行分析比较。观察到PVM/Ms荧光染色分布于耳蜗外侧壁、基底膜和螺旋缘,发现噪声暴露后急性期耳蜗PVM/Ms荧光染色分布减少。噪声暴露1天后PVM/Ms荧光染色分布率增加,5天达到峰值,14天恢复至噪声前水平。PVM/Ms可能通过分泌PEDF促进血管纹组织修复、拮抗血管内皮生长因子A (VEGFA)、抑制血-迷路屏障(BLB)通透性增加。为研究噪声引起的PEDF、VEGFA变化及PEDF、VEGFA对连接蛋白的影响作用,利用免疫印迹试验(Western blot)和实时荧光定量PCR (qPCR)技术对噪声暴露前后耳蜗外侧壁连接蛋白、色素上皮衍生因子(PEDF)、血管内皮生长因子A (VEGFA)及其受体VEGFR1、VEGFR2进行蛋白水平和mRNA水平的测试比较。发现噪声暴露后急性期 PEDF、VEGFA、VEGFR1、VEGFR2、VE-Cadherin 和 ZO-1 表达下调,Occludin 表达上调。PEDF、ZO-1、VE-Cadherin噪声损伤急性期(NE)至噪声后7天(NE7d)表达上调达峰值,至第14天(NE14d)表达下调。VEGFA、VEGFR1、VEGFR2噪声后急性期(NE)至噪声后第2天(NE2d)表达上调达峰值,至第14天(NE14d)表达下调。Occludin噪声急性期(NE)至噪声后第2天(NE2d)下调并达最低值,随后表达上调。通过研究可得出结论,噪声急性损伤刺激PVM/Ms胞体缩小、足突回缩,PEDF与连接蛋白表达量降低,增加血管纹BLB的通透性。噪声损伤中期为修复噪声引起的血管纹损伤,PVM/Ms激活、增多;PEDF表达增加促进ZO-1、VE-Cadherin表达,促进血管纹BLB的修复。噪声损伤中期VEGFA表达量增加,修复受损的微血管内皮细胞,后期由于PEDF的桔抗作用,VEGFA表达量降低。VEGFA对ZO-1、VE-Cadher i n、Occlud i n具有抑制作用,在噪声损伤后期Occ l ud i n表达量增加进一步修复血管纹BLB。PEDF、VEGFA与连接蛋白间具有相互交叉的作用,根据我们的结果我们推断PEDF对ZO-1的抑制作用较VEGFA的促进作用明显,VEGFA对Occludin具有明显的抑制作用。研究噪声引起的PEDF、VEGFA、连接蛋白表达变化,为发现其分子调控机制提供了新的思路,为我们进一步研究噪声引起的血管纹损伤机制提供了方向。