维生素D异常对精子发生的影响及机制的研究

来源 :湖南师范大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:fy863
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
目的:越来越多的研究表明维生素D除了在维持体内钙磷的稳态和调节骨代谢中发挥重要作用外,在生殖系统中也具有重要作用。一些研究显示体内血液维生素D缺乏与男性的生殖功能下降和生育能力降低相关,但是结论存在不一致,并且有一些研究显示血液中维生素D浓度过高时亦可能会造成精子活力降低和浓度降低。精原干细胞是男性生殖功能的种子细胞,但是维生素D对精原干细胞的具体作用,至今少见报道。本研究首先旨在研究维生素D异常对精原干细胞增殖和凋亡等细胞命运的影响和机制,其次研究维生素D异常时对雄鼠精子发生的影响和机制。方法:细胞实验部分:1.体外培养小鼠精原干细胞(C18-4),采用qRT-PCR和免疫荧光染色法鉴定细胞。2.采用CCK-8法检测不同浓度、不同作用时间1α,25-(OH)2D3处理对C18-4细胞活力和增殖的影响。3.采用流式细胞仪(Annexin V/PI染色)检测10-7M浓度1α,25-(OH)2D3处理对C18-4细胞凋亡的影响。4.采用qRT-PCR方法检测10-7M浓度1α,25-(OH)2D3处理对C18-4细胞Bcl-2、Bax、Vdr和Pcna基因表达的影响。动物实验部分:1.动物模型的建立:将SD雄性大鼠随机分为两组:(1)低维生素D(VDI)组(n=5)给予低维生素D饮食喂养14周;(2)正常饮食(VD)组(n=7)给予正常含量维生素D饮食喂养14周。平均两周记录一次大鼠体重,喂养第14周后集体处死,并记录身长、体重和左右睾丸重量。2.大鼠血清指标的检测:采取腹主动脉采血的方法,收集后分离血清,采用全自动生化分析仪测定维生素D(25(OH)D)、血清钙、血清碱性磷酸酶和血清磷。3.大鼠附睾精子密度测定:取大鼠附睾制备精子悬液并计数。4.大鼠睾丸切片制作和染色:取大鼠睾丸组织石蜡包埋后制作切片,予以H&E染色和PCNA免疫组织化学染色。统计学方法:采用SPSS 20.0统计软件包进行分析,以均数±标准差(Mean±SD)表示,两组间比较采用t检验,多组间比较采用单因素方差分析,如果方差齐则采用LSD法,如果方差不齐,则采用Dunnett’s T3法。P<0.05为差异有统计学意义。结果:细胞实验部分:1.细胞鉴定结果:经鉴定C18-4细胞为小鼠精原干细胞。2.CCK-8法检测结果:与对照组相比较,10-7M浓度1α,25-(OH)2D3处理24h和48h后A450值显著降低(P<0.05)。3.流式细胞仪检测结果:与对照组相比较,10-7M浓度1α,25-(OH)2D3处理48h后,早期细胞的凋亡比例显著增高(P<0.05)。4.qRT-PCR检测结果:与对照组相比较,10-7M浓度1α,25-(OH)2D3处理48h后,Bax基因和Vdr基因表达显著上调(P<0.05),而Bcl-2基因和Pcna基因表达显著下调(P<0.05)动物实验部分:1.大鼠生理指标测定结果:与VD组比较,VDI组体重,身长和左右侧睾丸重量的差异均无统计学意义(P<0.05)。2.血清学检测结果:与VD组比较,VDI组血清25(OH)D水平明显降低(P<0.01),血清碱性磷酸酶含量明显下降(P<0.05)。3.附睾精子密度检测结果:与VD组比较,VDI组附睾精子密度下降但无统计学差异(P<0.05)。4.H&E染色睾丸形态分析结果:与VD组比较,VDI组睾丸细胞切片中有少许空泡、细胞脱落和无精子的现象,但两组差异无统计学意义(P<0.05)。5.睾丸PCNA免疫组织化学染色结果:两组间PCNA蛋白表达的差异无统计学意义(P<0.05)。结论:1.较高浓度1α,25-(OH)2D3通过抑制Pcna的表达而抑制小鼠精原干细胞的增殖;通过上调Bax和下调Bcl基因表达而促进小鼠精原干细胞的凋亡。2.大鼠低维生素D饮食导致附睾精子密度趋势下降。
其他文献
化学交换饱和转移(Chemical exchange saturation transfer,CEST)技术在临床诊断中展现了巨大的潜力。CEST不仅可以对极低浓度的化学基团进行单独成像,而且可对基团所在环境的变化进行检测,非常适合分子成像研究。目前CEST在临床上的应用主要集中在脑部,如脑卒中、脑肿瘤等疾病的诊断与分级。随着技术的发展,体部CEST的应用也逐步进入人们的视野。然而,CEST序列在
学位
赣南瑶族花棍舞是瑶族人民在赣南这片红土地上,受地域、人文、自然等因素的影响,长期生产和生活中形成的赣南民间舞蹈。它凝结着过山瑶传统文化精神,反映了赣南瑶族人民的生活面貌、宗教信仰、思想感情和理想愿望,具有独特的地域风情。笔者从瑶族文化出发,试图通过“元素提炼”“动机提炼”“组合编排”“课堂教学”等实践研究,挖掘赣南瑶族花棍舞中典型性、观赏性、风格性的舞蹈动态,拓展花棍道具的训练性和可舞性,弘扬赣南
河口处于陆海交界处,是陆地和海洋物质交换的重要通道。随着气候环境日益变化与人类工程不断地发展,河口海岸系统也会受到影响而发生格局转换,河口泥沙运动是其中的关键过程。例如,河口三角洲冲淤转换、侵蚀加重、浑浊带位置偏移等,影响着河口地区生态、环境的可持续发展。泥沙的流变特性(屈服应力、黏度、剪切应力)始终贯穿在泥沙运动问题之中。因此对于泥沙流变学的充分研究,不仅是了解河口地貌演变的基础与依据,也是解决
随着电网的不断发展,电力系统不断趋于信息化和自动化,电网中的信息交互越来越频繁,因此,也就形成了电力物理网络与电力设备信息深度融合的电力信息物理系统(Cyber Physical System,CPS)。电网中频繁的信息交互,虽然使电力系统管理更加方便,运行效率得到很大的提升,但同时给电力系统的稳定性和可靠性带来了严峻的考验。在电力信息物理系统中有着许多的信息交互设备,使得黑客篡改电力系统中的信息
海岸带是经济社会发展最重要、人类活动最频繁的区域之一,易受风暴潮、海岸侵蚀等自然灾害影响。在可持续发展的背景下,为抵御未来可能的灾害风险,各国政府和学者近年来开始探讨利用盐沼植被构建海岸防护工程。现有研究主要关注盐沼植被消浪能力与评估,但较少关注其流速衰减能力。潮间带是潮流和植被相互作用最频繁的区域,该区域的盐沼植被通过减缓近底部流速,促进悬沙落淤、降低床面侵蚀风险,对沿海区域生态安全、社会经济与
学位
扭曲是力学测量中关键的物理量之一,在建筑结构扭转屈曲的安全监测、机器人关节转动测量等方面具有广泛应用,且具有方向识别能力的扭曲传感器尤为重要。光纤扭曲传感器相较于传统的电磁式或机械式扭曲传感器具有体积小、成本低、灵敏度高、无电磁干扰等优势,成为近年来的研究热点。目前的光纤扭曲传感器大多数是基于波长调制的,需要使用昂贵的光谱仪,成本较高。与光谱检测相比,光强检测具有响应速度快、成本低等特点,但光强调
2018年是中国和东盟建立战略伙伴关系的第15年,“世界工厂”正在从中国转移到东南亚国家,中国与东南亚国家的贸易往来变得更加紧密。同时东南亚国家的资本市场日益完善,资本化率出现了快速提升,很多上市公司都是中国企业的贸易服务配套商或者代工厂。随着两国的经济联系不断加深以及对外开放程度的不断提高,中国与东南亚国家股市的相关性显著提高,联动性研究成为各国学者的热门研究话题。当前学术界关于股市联动性的研究
作为一种新型社交方式,网络直播迅速发展壮大,获得了广泛关注。丰富多样的网络直播内容为学生提供了大量的信息资源,但未经区分的信息也给学生造成了很大的负面影响。如何解决网络直播的负面影响,如何通过网络直播平台开展思想政治教育、创新思想政治教育工作方式成为研究重点。