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研究目的本研究旨在观察活血降糖饮对糖尿病心肌病的治疗作用及其对神经调节蛋白1/表皮生长因子(NRG1/ErbB)信号通路的调控作用,为活血降糖饮治疗糖尿病心肌病提供理论依据,并尝试从分子层面探讨其作用机制。研究方法1.临床研究将符合糖尿病心肌病诊断标准50例患者随机分为治疗组25和对照组25例,其中医辨证均符合气虚血瘀证型,两组均采取相同的基础治疗,包括糖尿病特殊饮食教育、控制血糖。对照组在基础治疗加服贝那普利10mg,po,qd;治疗组在对照组的基础上加服活血降糖饮,水煎服,每日1剂,分2次服,以1个月为一个疗程。观察治疗前后总有效率及中医证候积分疗效,测定治疗前后生化指标空腹血糖、餐后两小时血糖、空腹胰岛素、糖化血红蛋白、总胆固醇、甘油三酯(FPG、2hPG、FINS、HbA1C、TC、TG);测定血浆超氧化物歧化酶、总抗氧化能力、谷胱甘肽过氧化物酶(SOD、T-AOC、GSH-PX)氧化应激指标;测定左室收缩末期内径、左室舒张末期内径、左心室射血分数、6分钟步行实验(LVESD、LVEDD、LVEF、6MWT)心功能指标;测定血清肿瘤坏死因子-a(TNF-a)及白细胞介素-6(IL-6)炎性指标进行比较。2.雄性SD随机分为对照组及处理组,处理组大鼠给予高糖高脂饮食4周后,用小剂量的链脲佐菌素(STZ 30mg/kg)诱导糖尿病大鼠模型。将造模成功的大鼠随机分为模型组,活血降糖饮低剂量组及高剂量组。活血降糖饮低剂量组每日灌服活血降糖饮水煎液(5g/kg/d);高剂量组给予每日灌服活血降糖饮水煎液(10g/kg/d)处理。给药8周后分别测定空腹血糖、甘油三酯、总胆固醇的含量、计算胰岛素抵抗指数及胰岛素敏感性,测定心肌细胞超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶、丙二醛(SOD、GSH-Px、MDA)酶活性,并进行超声心动图检测,心肌组织苏木精-伊红(HE)染色和TUNEL凋亡分析;此外,Q-PCR和Western blot分析NRG1、ErbB2、丝/苏氨酸激酶(AKT)、Bax、Bc l-2表达水平。研究结果一、临床研究部分(1)治疗后两组总有效率比较,治疗组84%,高于对照组680%,有统计学意义(P<0.05);中医证候积分比较,治疗后两组患者中医症状积分均明显降低(P<0.05),两组治疗前后差值比较,治疗组明显优于对照组(P<0.01)。(2)治疗后两组患者FPG、2hPG、FINS、HbA1C、TC和TG水平显著下降,且治疗组显著低于对照组,差异具有统计意义(K0.05)。(3)治疗后两组患者的SOD、T-AOC、GSH-PX水平均显著高于同组治疗前;差异均有统计学意义(P<0.05);与对照组相比,治疗组血浆SOD、T-AOC、GSH-PX水平均显著升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。(4)治疗后两组心功能指标LVESD、LVEDD、LVEF、6MWT均明显改善(P<0.05)。与治疗前相比,治疗组LVESD、LVEDD明显降低,且下降程度低于对照组(P<0.05);LVEF、6MWT均明显升高,且升高程度高于对照组(P<0.05)。(5)炎性指标TNF-a及IL-6治疗后均有明显下降(P<().05),且对照组优于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05)。二、动物实验部分(1)模型组中大鼠空腹血糖与对照组相比,显著性地增加(P<0.05),说明造模成功;活血降糖饮低剂量组及高剂量组处理后,使得空腹血糖降低,与模型组相比,差异均具有统计学意义(P<0.05);模型组中大鼠的血胰岛素与对照组相比,出现了显著上升的趋势(P<0.05);而活血降糖饮低剂量组及高剂量组中大鼠的血胰岛素与模型组相比均显著性下降(P<0.05),其含量接近对照组的水平。(2)模型组中大鼠总胆固醇和甘油三酯的含量与对照组相比,均显著性地增加(P<0.05);活血降糖饮低剂量及高剂量组处理后,总胆固醇和甘油三酯的含量降低,与模型组相比,具有统计学意义(P<0.05)。(3)模型组心肌组织与对照组相比SOD,GSH-Px活性明显降低(P<0.05),而活血降糖饮低剂量及高剂量组与模型组相比,均可使DCM大鼠心肌组织SOD,GSH-Px活性明显升高(P<0.05)。与对照组相比,模型组大鼠心肌组织MDA含量显著升高;与模型组相比,活血降糖饮低剂量及高剂量组可使DCM大鼠心肌组织MDA含量明显降低(P<0.05)。(4)模型组LVPWT、LVDD、LVDS增大,LVEF下降,与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。活血降糖饮组低剂量及高剂量组LVPWT、LVDD、LVDS、LVEF显著改善,与模型组比较,结果有统计学意义(P<0.05)。(5)对照组心肌细胞排列紧密并且整齐,细胞核经过染色,清晰可见;模型组心肌细胞排列紊乱,细胞肥大并且变形,细胞核染色较深,间质纤维化明显,有炎性细胞浸润;活血降糖饮低剂量及高剂量组心肌细胞排列稍乱,细胞形态对照组相比,大体相同,核染色比较清晰。模型组中TUNEL染色阳性细胞数目与对照组相比,显著增力加(P<0.05);活血降糖饮低剂量组及高剂量组相对于模型组比较,阳性染色细胞数目出现了下降趋势,均具有统计学意义(P<0.05)。(6)Western blot 检测各组NRG1、p-ErbB2、p-AKT、Bax、Bcl-2蛋白表达水平,模型组中NRG1、p-ErbB2、p-AKT和Bcl-2蛋白表达水平呈现出下降的趋势,而Bax蛋白表达呈现出上升的趋势,与对照组相比,具有显著性差异(P<0.05);活血降糖饮组处理后,其NRG1、p-ErbB2、p-AKT和Bcl-2表达与模型组相比显著增加,Bax表达显著降低,均具有统计学意义(P<0.05),其改善程度呈剂量依懒性。(7)荧光定量PCR分别检测各组NRG1、ErbB2、AKT、Bax、Bcl-2mRNA表达水平,模型组中NRG1、ErbB2、AKT和Bcl-2基因表达水平呈现出下降的趋势,而Bax基因表达呈现出上升的趋势,与对照组相比,具有显著性差异(P<0.05);活血降糖饮组处理后,其中NRG1、ErbB2、AKT和Bcl-2表达与模型组相比显著增加,Bax表达显著降低,均具有统计学意义(P<0.05),其改善程度呈剂量依懒性。结论1.气阴两虚是糖尿病心肌病的发病基础,瘀血阻络是糖尿病心肌病的重要致病因素,故以益气养阴、活血化淤为基本治法的活血降糖饮对糖尿病心肌病患者有效。2.活血降糖饮可改善糖尿病心肌病的糖脂代谢,改善患者机体氧化应激状态,下调炎症因子TNF-a及IL-6水平,改善患者心功能水平及预后。3.活血降糖饮能显著上调糖尿病心肌病大鼠SOD,GSH-Px活性水平,下调MDA水平,改善LVDD、LVDS、LVPWT、LVEF心功能指标,减少心肌细胞凋亡。其作用机制可能与抑制心肌细胞的氧化应激反应有关,通过NRG1/ErbB通路调节Bax、Bcl-2蛋白的表达,减少心肌细胞凋亡,改善线粒体氧化应激,纠正内皮功能紊乱,从而达到改善微循环的作用。