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毒死蜱(Chlorpyrifos)是一种常用的有机磷杀虫剂,其化学名称为:O,O-二乙基-O-(3,5,6-三氯-2-吡啶基)硫代磷酸酯,主要用于农作物害虫和家庭卫生害虫的防治。毒死蜱作为高毒农药甲胺磷、甲基对硫磷等替代品被广泛使用,现已成为世界上应用最广泛的杀虫剂之一。近年来,毒死蜱的毒性效应备受关注,许多国家已经认识到毒死蜱的危害,并逐步限制甚至禁止使用毒死蜱。毒死蜱在环境中的主要降解产物为TCP(3,5,6-三氯-2-吡啶酚),毒死蜱的广泛使用导致环境中存在一定量的TCP。TCP较毒死蜱水溶性大、移动性强,从而更容易渗入地下,污染水体和土壤,对环境生物造成危害。本研究采分子生物学技术,研究了毒死蜱及其降解产物TCP对蚕豆、蚯蚓和土壤微生物的毒性影响,为了解和认识毒死蜱及降解产物TCP对生态系统的影响提供依据。主要研究结果如下:1、微核实验:将蚕豆次生根的根尖分别用0.01、0.1、1.0、10.0 mg·L-1毒死蜱溶液和0.01、0.1、1.0、5.0 mg·L-1TCP溶液处理12、24、36、48h,测定蚕豆根尖细胞微核率。实验结果表明,一定剂量的毒死蜱和TCP可诱导蚕豆根尖细胞产生微核,这说明毒死蜱和TCP对蚕豆根尖细胞可造成一定程度的遗传损害;通过比较毒死蜱和TCP诱导蚕豆根尖细胞产生的微核率,可知毒死蜱降解产物TCP对蚕豆具有更大的遗传毒性。2、单细胞凝胶电泳实验(SCGE):在人工土中添加毒死蜱,使得毒死蜱的终浓度为0.01、0.1、1.0和10.0mg·kg-1,另在人工土中添加TCP,使得TCP的终浓度为0.01、0.1、1.0和5.0mg·kg-1,然后将赤子爱胜蚓放入人工土中染毒7、14、21、28d,通过单细胞电泳检测了毒死蜱及TCP对蚯蚓体腔细胞DNA的损伤。实验结果表明:经不同浓度毒死蜱和TCP处理均可造成蚯蚓细胞DNA损伤,而且随着浓度的增加和时间的延长,彗星拖尾长度、Olive尾矩的值呈上升的趋势,这说明毒死蜱、TCP可对蚯蚓体腔细胞DNA造成损伤,损伤程度与毒死蜱、TCP的浓度、处理时间存在剂量-效应和时间-效应关系。通过比较相同条件下毒死蜱与TCP对蚯蚓体腔细胞DNA所造成影响,可知毒死蜱降解为TCP后毒性加大。3、变性梯度凝胶电泳实验(DGGE):以山东农业大学南校区试验农场土壤为材料,在室内培养的基础上,运用变性梯度凝胶电泳技术,研究了0.01、0.1、1.0、10.0mg·kg-1的毒死蜱和0.01、0.1、1.0、5.0mg·kg-1的TCP对土壤微生物多样性的影响。实验结果表明,毒死蜱和TCP对土壤微生物的多样性存在一定的影响;与对照相比,高浓度毒死蜱(10.0mg·kg-1)和TCP(5.0mg·kg-1)可对土壤微生物多样性产生较为显著的影响,但随着时间的延长,毒死蜱的影响是可恢复,TCP对土壤微生物的影响持续较长。