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透明质酸酶(Hyaluronidase, Hyal)是具有降解透明质酸活性的一类酶的总称。Hyal可通过作用于p-1,3或p-1,4糖苷键将透明质酸(Hyaluronid acid, HA)降解为低分子量透明质酸(LMHA)或寡聚透明质酸(O-HA)= LMHA和O-HA在食品、化妆品、医药上有着广泛的应用,但目前LMHA和O-HA的制备方法仍有待完善。本论文通过细菌细胞表面展示技术,构建透明质酸酶细菌细胞表面展示体系,并用于LMHA和O-HA的制备。根据GenBank分布的兽疫链球菌Hyal蛋白编码基因序列,设计引物,通过PCR获得了兽疫链球菌SM001透明质酸酶基因2.6kb,该基因与GenBank中已有的Streptococcus equi subsp. zooepidemicus strain ATCC 35246、Streptococcus equi subsp. zooepidemicus strain NC88 和Streptococcus equi subsp. zooepidemicus cvcc23362 Hyal基因的相似性分别为96.10%、97.26%和98.15%,其编码氨基酸序列与该三种基因编码蛋白的相似性分别为90.02%、91.13%和90.13%。通过生物进化树分析,该Hyal蛋白位于马疫链球菌兽疫亚种的分支之中。用EcoRⅠ/BglⅡ酶切质粒,回收hval和pTrcHisC-inaQ-N片段,酶连,构建含inaQ-N/hyal融合基因的重组质粒pMF004。同时,构建含hyal基因的胞内对照质粒pMF003。两质粒分别转化大肠杆菌宿主菌JM109,经筛选鉴定最终获得重组菌MF003 (JM109/pMF003)和 MF004 (JM109/pMF004)。重组菌MF004经过IPTG诱导浓度、诱导温度以及反应温度、pH和Ca2+浓度等的条件优化实验,结果显示在0.8mM IPTG诱导浓度和30℃时诱导下,经诱导10h后,反应条件为pH6.0、0.8-1.OmM的Ca2+浓度下,酶活达到最优。通过SDS-PAGE和WesternBlot验证,结果表明InaQ-N/Hyal融合蛋白分子量大小约116kDa,其中Hyal约为96kDa。经过对构建的Hyal细菌细胞表面展示体系的展示性能进行分析,蛋白酶实验结果显示当蛋白酶处理1h后,酶活降低了75%,表明融合蛋白InaQ-N/Hyal能分泌锚定于大肠杆菌JM109细胞表面展示表面为检测该体系降解HA活性,本研究比较了粘度法、浊度法和摩根-埃尔森法三种方法,结果表明粘度法具有最好的检测效果。对表面展示体系酶促反应条件进行摸索,结果显示在37℃、pH6.0、1.0mM的Ca2+浓度下重组菌MF004具有稳定的HA降解活性。重组菌MF004作为全细胞催化剂降解高分子量HA实验表明,该重组菌在1h内可将0.2mg/mLHA的平均分子量可从1500kDa降低至100kDa以下,并且平均分子量稳定在70kDa仅需3h。