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第一部分氯化锂-匹罗卡品颞叶癫痫大鼠模型的建立及脑电、病理观察目的研究氯化锂-匹罗卡品颞叶癫痫模型大鼠行为学、电生理及病理学改变,进一步探讨癫痫发作造成的海马神经元损伤。方法成年雄性Wistar大鼠,腹腔注射氯化锂-匹罗卡品诱发大鼠出现癫痫持续状态(status epilepticus,SE),SE持续1h后注射地西泮终止发作。其后每天观察记录大鼠有无自发性痫性发作(spontaneous recurrent seizures,SRS),于致痫后3h、7d和45d分别对大鼠进行EEG描记,并将大鼠在各时间点断头取脑,用HE、Nissl和Timm染色观察大鼠海马病理学改变,并用免疫组化检测海马神经肽Y(neuropeptide Y,NPY)和胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)阳性神经元的表达。结果氯化锂-匹罗卡品致痫大鼠SE诱发率为89%,在经过平均14.5±5.9天潜伏期后,可观察到SRS;EEG在急性期表现为丛集性棘波放电,潜伏期EEG正常,慢性痫性发作期可见癫痫样放电;HE、Nissl及Timm染色可观察到大鼠海马神经元损伤和苔藓纤维出芽(mossy fiber sprouting,MFS);免疫组化显示NPY阳性神经元沿苔藓纤维及MFS的途径表达增多,GFAP标记的星形胶质细胞增生。结论氯化锂-匹罗卡品致痫后根据大鼠行为学和EEG改变可分为急性期(SE发作)、静息期和慢性期(SRS阶段)。氯化锂-匹罗卡品致痫后可造成海马神经元损伤,苔藓纤维出芽和星形胶质细胞增生,NPY具有抗癫痫的作用。第二部分颞叶癫痫大鼠海马线粒体超微结构和呼吸链酶复合体活性的改变目的研究氯化锂-匹罗卡品致痫后海马线粒体超微结构和呼吸链四种酶复合体活性的改变,探讨癫痫与线粒体的关系。方法成年雄性Wistar大鼠随机分为生理盐水对照组、SE后急性期(3h)、静止期(7d)、慢性期(45d)组和注射匹罗卡品但未出现SE组。电镜观察线粒体超微结构的变化,酶分析法检测线粒体呼吸链NADH-泛醌氧化还原酶(复合体Ⅰ)、琥珀酸-泛醌氧化还原酶(复合体Ⅱ)、泛醇-高铁细胞色素C氧化还原酶(复合体Ⅲ)和细胞色素C氧化酶(复合体Ⅳ)四种酶活性。结果(1)SE后可观察到大鼠海马神经元的线粒体有不同程度的损伤,轻者间隙肿胀(尤其是嵴部分),但膜的结构尚完整,较重者线粒体基质消失,结构破坏,重者线粒体明显空泡化,伴内外膜的崩解。随时间延长线粒体损伤逐渐加重,即慢性期线粒体损伤最重。(2)大鼠海马复合体Ⅰ的活性在SE后3h、7d和45d均有显著性降低(P<0.05vs对照组)。复合体Ⅱ的活性在SE后不同时间点较对照组均无显著性差异。复合体Ⅲ的活性在SE后3h轻度升高,7d降至对照水平,至45d显著下降(P<0.05vs对照组)。复合体Ⅳ在SE后3h显著性升高(P<0.01vs.对照组),7d降至对照水平,至慢性期进一步下降,且差异有统计学意义(P<0.01vs.对照组)。注射PILO但无SE组与对照组结果类似。结论实验性颞叶癫痫存在着线粒体超微结构的损伤和线粒体编码酶活性的改变,表明线粒体对癫痫十分敏感。线粒体与癫痫之间结构和功能上的联系为减轻癫痫后脑损伤和神经保护的发展提供了新的展望。第三部分颞叶癫痫大鼠海马线粒体细胞色素氧化酶亚基Ⅲ和Ⅳ表达的变化目的研究氯化锂-匹罗卡品致痫后海马线粒体细胞色素氧化酶(cytochrome c oxidase,COX)亚基Ⅲ(COXⅢ,线粒体DNA编码)和亚基Ⅳ(COXⅣ细胞核DNA编码)在基因和蛋白水平表达的影响,探讨痫性发作对线粒体基因和核基因表达的影响。方法成年雄性Wistar大鼠随机分为生理盐水对照组、SE后急性期(3h)、静止期(7d)、慢性期(45d)组和注射匹罗卡品但未出现SE组。免疫组织化学、实时定量PCR和Western blot法检测海马线粒体COXⅢ、ⅣmRNA和蛋白的表达。结果(1)免疫组化染色结果:COXⅢ急性期(SE后3h),CA1、CA3、齿状回和门区的阳性神经元胞体被染成棕黄色,且阳性神经元数量较对照组明显升高(P<0.01);静止期(7d),阳性神经元数量逐渐减少,其表达主要局限于齿状回、CA3区和CA1区;慢性期(45d),阳性神经元数量较对照组明显降低(P<0.05),可发现部分神经元变性、死亡。COXⅣ阳性神经元数量在急性期较对照组有轻微的升高,但无显著性差异。静止期和慢性期,COXⅣ的阳性神经元的表达及分布与对照组相似,差异无显著性。接受匹罗卡品但未出现SE组中阳性神经元的表达与对照组相似。(2)实时定量PCR:COXⅢmRNA在SE后3h表达明显升高,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.001),7d时表达有所下降,但与对照组无显著性差异,45d显著降低(P<0.001);COXⅣmRNA在3h时表达较对照组升高,但差异无显著性,然后逐渐下降,至7d和45d时下降至对照水平。注射PILO但未出现SE组COXⅢ和COXⅣ的表达与对照组类似。(3)Western blot:COXⅢ在SE后3h表达明显升高(p<0.01),7d时降到对照水平,45d显著降低(p<0.01);COXⅣ在3h时表达较对照组升高,但差异无显著性,7d和45d时下降至对照水平。注射PILO但未出现SE组COXⅢ、Ⅳ的表达与对照组类似。结论癫痫可引起线粒体编码的COXⅢ亚基在基因和蛋白水平的表达改变,而核编码的亚基COXⅣ改变不明显,说明癫痫可导致线粒体功能紊乱,线粒体编码的基因更易受痫性发作的影响。线粒体与癫痫之间功能上的联系为减轻SE后脑损伤和神经保护的发展提供了新的展望。