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目的:探讨NGF、N-RAS在涎腺腺样囊性癌(salivary adenoid cystic carcinoma,SACC)嗜神经侵袭中的作用,分析NGF、N-RAS之间的相关性,以及NGF对涎腺腺样囊性癌细胞恶性生物学行为的影响,并进一步明确NGF调控N-RAS在涎腺腺样囊性癌嗜神经侵袭中的作用。方法:1.NGF、N-RAS与SACC嗜神经侵袭的关系及二者的相关性:收集天津医科大学肿瘤医院涎腺腺样囊性癌石蜡标本共75例,分为嗜神经侵袭组与非嗜神经侵袭组两组,通过免疫组织化学法检测两组SACC石蜡标本中NGF、N-RAS的表达情况,并行相关性分析。2.(1)NGF对N-RAS的调控作用:加入外源性NGF和NGF抑制剂PD90780培养后,通过Western blot检测涎腺腺样囊性癌高转移细胞株ACC-M中的N-RAS表达变化;(2)NGF对涎腺腺样囊性癌增殖、迁移、侵袭能力的影响:通过平板克隆实验、CCK-8实验检测ACC-M细胞的增殖能力变化,划痕和Transwell趋化实验检测ACC-M细胞的迁移能力变化,Transwell侵袭实验检测ACC-M细胞的侵袭能力变化;(3)NGF调控N-RAS影响SACC嗜神经侵袭:构建ACC-M与大鼠背根神经节(dorsal root ganglion,DRG)的体外共培养模型,模拟SACC神经侵袭的发生过程,利用该模型观察不同水平NGF下背根神经节轴突的生长情况、ACC-M细胞的迁移侵袭情况,观察腺样囊性癌细胞向背根神经节发生神经侵袭的动态过程。结果:1.NGF、N-RAS主要在涎腺腺样囊性癌细胞的胞浆中阳性表达,在嗜神经侵袭组的阳性率分别为为89.1%、80.4%,在非嗜神经侵袭组的阳性率分别为44.8%、51.7%。并且NGF、N-RAS均在神经侵犯处呈强阳性表达,在非神经侵犯处呈阴性表达。SACC嗜神经侵袭组的NGF阳性表达率显著高于非嗜神经侵袭组(χ~2=17.317,P=0.000),N-RAS的阳性表达率也显著高于非嗜神经侵袭组(χ~2=6.896,P=0.009)。经Spearman等级相关分析,SACC中N-RAS与NGF的表达呈正相关关系(r=0.294,P=0.011)。2.(1)分别将外源性NGF+ACC-M组、NGF抑制剂PD90780+ACC-M组、ACC-M NC组这三组培养24h和48h后,Western Blot结果显示与ACC-M NC对照组相比,在24h和48h时,N-RAS在外源性NGF组中均表达增高,在NGF抑制剂PD90780组均表达降低;(2)与ACC-M NC组相比,外源性NGF+ACC-M组的细胞增殖、迁移、侵袭能力明显增强,而抑制剂PD90780+ACC-M组细胞的增殖、迁移、侵袭能力明显减弱;(3)成功构建人腺样囊性癌细胞系与大鼠背根神经节的共培养模型ACC-M/DRG,与DRG单独培养组相比,在ACC-M NC/DRG共培养体系中,可发现DRG周围则可见较多的神经轴突生长,ACC-M细胞的增殖并向轴突方向迁移。在外源性NGF+ACC-M/DRG共培养体系中,与ACC-M NC/DRG共培养组相比,可见ACC-M细胞的增殖速度加快,DRG的神经轴突向ACC-M细胞集落方向特异性生长,当轴突与ACC-M细胞接触后,ACC-M细胞包绕轴突,并沿着神经轴突向DRG的主体方向迁移,最终ACC-M细胞迁移至DRG周围并包绕神经节。结论:1.NGF、N-RAS与涎腺腺样囊性癌嗜神经侵袭密切相关,并且NGF与N-RAS呈正相关关系。2.NGF在涎腺腺样囊性癌中正性调控N-RAS,增强涎腺腺样囊性癌细胞的增殖、迁移、侵袭能力;涎腺腺样囊性癌嗜神经侵袭这一特性是神经细胞和腺样囊性癌细胞相互作用的结果,NGF正性调控N-RAS促进涎腺腺样囊性癌的嗜神经侵袭的过程。