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疟疾是当今世界重要的传染性疾病之一,每年在世界范围内造成数十万感染者的死亡,其中绝大多数是由感染恶性疟疾引起的。孕妇和儿童是主要的易感人群。疟原虫耐药株尤其是化学药物耐药株的出现是消灭疟疾的主要障碍之一。与此同时,化学药物所产生的严重的不良反应阻碍了孕妇和婴儿获得合适的治疗方案。抗体药是抗疟治疗的新策略,疟原虫相关蛋白配体与宿主细胞表达的受体蛋白的发现为其提供了契机。然而疟原虫具有种属特异性,极大地限制了抗体尤其是人源化单克隆抗体的抗疟药效评估模型的选择。在小动物模型中,感染恶性疟原虫的人红细胞移植免疫缺陷小鼠模型成为了一种评估抗疟药体内药效的很好的工具,并得到越来越广泛的认可和应用。在体外实验中,本实验室针对受体蛋白CD147研制的人源化单克隆抗体HP6H8对不同株的恶性疟原虫都有显著的抑制效果(该部分实验由本实验室张梦瑶博士完成)。但是该抗体在体内能否达到同样的抗疟效果,仍是一个亟需解决的问题。本研究旨在通过构建感染恶性疟疾的人红细胞移植NOD/SCID小鼠模型来评估人源化单克隆抗体HP6H8的体内抗恶性疟疾的药效学效果。研究主要由两部分内容组成:第一部分:构建感染恶性疟原虫的人红细胞移植NOD/SCID小鼠模型通过腹腔注射免疫抑制剂,抑制NOD/SCID小鼠体内以巨噬细胞为主的先天性免疫反应以及由外源物质引起的炎症反应。采用多次静脉注射的方法,构建外周血移植人红血细胞的NOD/SCID小鼠模型。采用流式细胞技术,检测人红细胞移植NOD/SCID小鼠外周血中人红血细胞的移植率,剔除人红血细胞移植率过低的小鼠。选用国际标准株3D7,采用单次静脉注射的方法感染人红血细胞移植NOD/SCID小鼠。小鼠感染恶性疟原虫后,尾静脉取血制备薄血膜涂片,吉姆萨染色后进行显微镜检观察小鼠外周血中恶性疟原虫生存状态。实验结果显示,NOD/SCID小鼠外周血中人红血细胞的移植率可达到80%以上,恶性疟原虫能够在人红细胞移植小鼠外周血中以0.1%左右的初始原虫率经历完整的红细胞内期生活周期并且能够正常增殖,表明我们成功构建了感染恶性疟原虫的人红细胞移植NOD/SCID小鼠模型。第二部分:人源化单克隆抗体HP6H8体内药效评估运用感染恶性疟原虫的人红细胞移植NOD/SCID小鼠模型,进行人源化单克隆抗体HP6H8的体内抗恶性疟疾药效学评估。依据外周血人红血细胞移植率以及给药前恶性疟原虫的感染率,对小鼠进行随机分组。人红细胞移植小鼠感染恶性疟原虫后,通过静脉途径单次注射给药。每天小鼠尾静脉取血制备薄血膜涂片,吉姆萨染色后显微镜检观察各组小鼠外周血中恶性疟原虫的生存状态。统计结果显示,人源化单克隆抗体HP6H8体内抑制恶性疟原虫的有效浓度为0.948mg/kg;给药剂量为2mg/kg时,小鼠外周血中的疟原虫被完全清除。综上所述,本研究成功构建了恶性疟原虫感染的人红细胞移植NOD/SCID小鼠模型。本研究成功利用构建的恶性疟小鼠模型对人源化单抗HP6H8进行体内抗恶性疟疾药效学评估。本实验室研制的人源化单抗HP6H8具有显著的体内外抗疟效果,对其进行进一步的临床前研究具有重要的借鉴意义。