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背景与目的:HOTAIR与多种肿瘤的发生发展有关,在许多肿瘤中呈现高表达状态,作为lncRNA中的一个明星分子,HOTAIR在各种肿瘤中的研究多不胜数。当然,在肺癌中的研究也有相当的进展,而肺癌在我国发病率及病死率常年居高不下,目前也有很多治疗手段及分子靶向药在不断地更新;分子靶向治疗改变了肺癌的治疗历史,但是,由于获得性耐药的出现,最终导致疾病复发和治疗的失败,也成为肿瘤治疗领域所面临的难题。本研究就HOTAIR在非小细胞肺癌中EGFR-TKIs通过调控细胞周期介导耐药进行了一系列机制的探讨。方法:本研究首先结合前期实验结果的总结与分析后沿袭前期实验所用细胞PC-9,PC-9/AB2细胞对其分别进行过表达和敲低HOTAIR的稳转细胞系的建立,以上述所建立稳转细胞系为本研究的主要实验对象,通过流式细胞分析细胞周期、CCK8实验检测细胞耐药性、Western Blot实验明确HOTAIR可在蛋白水平调控细胞周期;进一步运用si-RNA干扰技术、染色质免疫共沉淀技术以及EDU检测细胞增殖实验共同阐述HOTAIR通过表观遗传水平调控细胞周期介导耐药;运用miRNA测序及靶基因预测的方式,通过荧光素酶报告基因实验及转染等方法阐述HOTAIR通过miRNA调控细胞周期参与耐药机制,同时也运用一些抑制剂(如DZNEP抑制EZH2、PD抑制细胞周期、EED226抑制H3K27甲基化)在相应的调控位点明确此位点所发挥的作用。结果:结合前期实验,本研究发现HOTAIR在耐药细胞系中表达量较高,尤其是获得性耐药细胞系中(PC-9/AB2),通过裸鼠成瘤后肿瘤组织石蜡切片进行免疫组化染色发现过表达HOTAIR后P16、P21表达下降,后续实验结果显示HOTAIR可阻滞细胞分裂时的G1期,延长S期,并且在蛋白水平沉默P16、P21,修饰Rb磷酸化,上调了E2F1、CDK4、CDK6、CyclinD1表达,以此促进细胞周期进程介导耐药发生。在蛋白水平然后我们也发现HOTAIR可上调EZH2/H3K24表达,而后实验结果提示HOTAIR通过表观遗传修饰EZH2/H3K24调控P16、P21和E2F1的表达以加速细胞周期进程从而参与到耐药机制中。miRNA测序提示HOTAIR升高了miR-1249-5P和miR-1910-3P的表达,进一步实验结果提示HOTAIR与miR-1249-5P和miR-1910-3P相辅相成共同作用于调控细胞周期介导耐药发生结论:1.HOTAIR可通过加速细胞周期进程而调控非小细胞肺癌EGFR-TKIs耐药。2.HOTAIR在表观遗传水平通过修饰EZH2/H3K27调控细胞周期参与EGFR-TKIs耐药机制。3.HOTAIR与miR-1249-5P和miR-1910-3P共同调控细胞周期介导非小细胞肺癌EGFR-TKIs耐药。