鲍曼不动杆菌脓毒症大鼠中性粒细胞的蛋白质组学研究

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目的:通过分离并鉴定鲍曼不动杆菌脓毒症大鼠中性粒细胞的差异表达蛋白质,以发现可能在鲍曼不动杆菌脓毒症中起关键作用的蛋白和可用于早期诊断的鲍曼不动杆菌脓毒症标志物。方法:将24只成年雄性Wistar大鼠分为正常对照组、鲍曼不动杆菌脓毒症6小时组和鲍曼不动杆菌脓毒症12小时组,正常对照组腹腔注射生理盐水,鲍曼不动杆菌脓毒症组腹腔注射鲍曼不动杆菌(ATCC19606),并于6小时和12小时后取外周血分离中性粒细胞,提取中性粒细胞的总蛋白后利用双向凝胶电泳分离蛋白并进行银染,使用ImageMaster软件进行分析比较,选取在鲍曼不动杆菌脓毒症中明显差异表达的蛋白点行质谱分析,并选取蛋白加以免疫印迹验证。结果:1.获得了分辨率和重复性均很好的双向凝胶电泳蛋白图谱,每组胶的蛋白表达点为2900个左右,平均匹配率分别为95%、90%、91%。2.对筛选出的在鲍曼不动杆菌脓毒症中明显差异表达的50个蛋白点,共有41个蛋白点被成功鉴定,分别属于抗氧化蛋白、信号传导蛋白、细胞骨架及调控蛋白、能量代谢蛋白和蛋白酶类蛋白,其中在鲍曼不动杆菌脓毒症中高表达的24个,低表达的17个。3.在41个蛋白中选取蛋白进行免疫印迹验证,验证结果基本与双向凝胶电泳及质谱鉴定结果一致。结论:1.鲍曼不动杆菌脓毒症大鼠中性粒细胞总蛋白和正常大鼠中性粒细胞总蛋白相比差异显著,且脓毒症6小时组和12小时组的部分蛋白也有显著差异。2.本实验成功鉴定出41个差异点,分别属于抗氧化蛋白、信号传导蛋白、细胞骨架及调控蛋白、能量代谢蛋白和蛋白酶类蛋白,这些蛋白的改变和鲍曼不动杆菌脓毒症时中性粒细胞的过度活化或抑制密切相关。3.差异蛋白中的抗氧化蛋白和信号传导蛋白可能在鲍曼不动杆菌脓毒症中起关键作用并且可能为早期诊断和治疗鲍曼不动杆菌脓毒症提供新的理论依据。
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