论文部分内容阅读
目的:本研究旨在探索性研究潜在的抗肝癌药物维生素K2(Vitamin K2,VK2)对肝癌细胞的抑制作用,初步探讨其可能的机制。方法:利用Bel-7402细胞及Hep G2细胞体外培养,按方案加药,研究Bel-7402细胞及Hep G2细胞的增殖情况。选取抑制率较高的Bel-7402细胞进一步经流式细胞术测定细胞周期及细胞凋亡,Western Blot检测相应凋亡相关蛋白的表达。加入溶酶体抑制剂氯喹阻断自噬过程,Western Blot检测相应自噬相关蛋白的表达。结果:CCK8检测细胞体外增殖结果显示:VK2可以抑制肝癌细胞系Bel-7402细胞和Hep G2细胞的生长。流式细胞仪检测细胞周期分布结果显示:Bel-7402细胞可被VK2阻滞在G1期。流式细胞仪检测细胞凋亡结果显示:对照组、50μM VK2组及200μM VK2组处理(24小时)的凋亡率分别为0.28±0.038%、0.62±0.27%、1.23±0.69%(p>0.05)。Western Blot检测相关蛋白结果显示:50μM VK2组及200μM VK2组处理(48小时)能够增加肝癌Bel-7402细胞Cleaved Caspase 3、Cleaved PARP表达。VK2处理(48小时)能够诱导肝癌Bel-7402细胞线粒体自噬相关蛋白LC3-Ⅱ、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值(P<0.01)、PINK1(P<0.01)、p62/SQSTM1(P<0.01)、Parkin(P<0.05)的表达量增加。VK2中加入氯喹(Chloroquine)处理后能够进一步增加蛋白LC3-Ⅱ、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ(P<0.05)、PINK1(P<0.01)及p62/SQSTM1(P<0.05)的表达量,减少蛋白p-m TOR(P<0.001)和Parkin(P<0.05)的表达量。结论:本研究通过体外细胞试验发现VK2能抑制肝癌Bel-7402及Hep G2细胞体外生长,并在Bel-7402细胞株中表现出时间和剂量依赖性。通过流式细胞术检测细胞凋亡及Western Blot检测凋亡和自噬相关蛋白提示,VK2抑制肝癌细胞体外生长可能与细胞自噬相关。VK2具有用于辅助治疗肝癌的潜能。