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鸡马立克氏病(Marek’s Disease,MD)是鸡的一种高度接触性淋巴细胞增生性传染病,由马立克病毒(Marek’s Disease Virus,MDV)感染引起,并引起鸡群较高的发病率和死亡率,是危害养鸡业健康发展的主要疫病之一。一直以来对MD的防控主要集中在MD发病机制的免疫学研究及疫苗的研制,而对于养殖过程中鸡群群体MD的防控监测及检测方法的研究报道较少,该问题的解决可为MD流行和爆发的防控提供有效的手段。此外,MD监控样本选取应本着对鸡群生产性能无影响的原则,因此,非伤害性样本MD检测标志物的筛选将为MD的防控提供有意义的参考。课题组前期通过测序分析预测,获得p53结合蛋白1(TP53 binding protein,TP53BP1)。长链非编码RNA,长链非编码RNA(long non-coding RNA,lnc RNA)是一类不编码蛋白质的长度超过200nt的内源性RNA分子,p53结合蛋白1是可以与肿瘤抑制因子p53互作,并参与细胞凋亡的调节过程。因此,预测获得的鸡p53结合蛋白1lnc RNA-2(TP53BP1-lnc RNA-2)可能参与MDV的致病过程,并可能成为鸡群MDV感染与病程监控的候选标志物。本研究拟应用MDV感染1日龄SPF雏鸡,通过检测分析MDV感染不同时期(Day Post Infection,dpi)鸡的脾脏、羽髓组织、空肠组织的TP53BP1-lnc RNA-2及其靶基因的表达水平,并对MDV感染42dpi的空肠组织微观组织结构进行病理学观察,探讨在MDV感染不同时期鸡p53结合蛋白1 lnc RNA-2及其靶基因的表达变化及空肠微观结构的损伤情况,筛选鸡群MD流行和爆发防控的检测候选标志物及其非伤害性样本,并对TP53BP1-lnc RNA-2进行体外功能分析,为鸡养殖过程中鸡群MDV感染的实时监控与诊断及防控药物研发的靶点筛选提供参考依据。本试验选取200只1日龄SPF雏鸡,相同环境下随机平均分为试验组和对照组,对照组100只,腹腔注射PBS(p H=7.4)0.5m L/只;试验组100只,腹腔注射MDVBJ-1株血毒0.5m L/只(1000PFU/只),并隔离饲养。在MDV感染后的第1、7、14、21、35、42天,采集鸡的脾脏、羽髓、空肠组织样品,应用q RT-PCR和Western Blot等分子生物学技术检测MDV感染对鸡脾脏、羽髓组织中TP53BP1-lnc RNA-2表达水平及其靶基因的影响;并制备42dpi鸡空肠组织的电镜切片,观察MDV感染对鸡空肠上皮细胞微观结构的影响;构建p EGFP-N1-TP53BP1-lnc RNA-2表达载体和p Green-TP53BP1-lnc RNA-2 sh RNA干扰载体,转染至鸡DF-1细胞系,利用q RT-PCR和Western Blot技术对鸡TP53BP1-lnc RNA-2进行体外功能的分析。在鸡MDV感染后,随着病毒感染时间的延长,对照组鸡TP53BP1lnc RNA-2表达水平各时间点无显著差异,试验组鸡脾脏组织TP53BP1-lnc RNA-2在1-14dpi呈显著上升趋势(p<0.05),在21dpi显著下降(p<0.05),并在21dpi至42dpi呈显著上升趋势(p<0.05),其p53蛋白量呈极显著上升趋势(p<0.01);试验组鸡羽髓组织中TP53BP1-lnc RNA-2从14dpi至42dpi呈极显著下降趋势(p<0.01),其p53蛋白表达量在1至14dpi呈极显著下降趋势(p<0.01),14-42dpi呈极显著上升趋势(p<0.01);试验组空肠上皮细胞微绒毛断裂,细胞核染色质聚集,线粒体嵴断裂,逐渐消失最终线粒体形成空泡,其TP53BP1-lnc RNA-2及p53基因转录水平呈极显著上升(p<0.01);成功构建p EGFP-N1-TP53BP1-lnc RNA-2表达载体并转染DF-1细胞后,其TP53BP1-lnc RNA-2转录水平极显著上升(p<0.01),p53转录水平及蛋白表达量显著上升(p<0.05),成功构建p Green-TP53BP1-lnc RNA-2sh RNA载体并转染DF-1细胞后,其TP53BP1-lnc RNA-2转录水平极显著下降(p<0.01),p53转录水平及蛋白表达量显著下降(p<0.05)。研究结果表明,TP53BP1-lnc RNA-2在鸡的不同dpi转录水平的变化,与MD的发病进程相关;在临床中可选择羽髓组织作为非伤害性取样;p53蛋白表达量的变化,以监测鸡群发生MD。在42dpi空肠组织中该基因转录水平与脾脏组织一致,因此空肠组织也可作为临床诊断标志物候选之一。TP53BP1-lnc RNA-2通过影响肿瘤相关因子p53转录及表达水平及其功能,进而影响MDV感染鸡的T淋巴细胞的中肿瘤的发生与发展。