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寨卡病毒(Zikavirus,ZIKV)是一种通过蚊虫叮咬传播的RNA病毒,于1947年在乌干达寨卡丛林的发热恒河猴体内首次被发现,根据基因型差异,可分为非洲型和亚洲型。虽然ZIKV很早被发现,但由于患者临床症状轻微,仅表现为皮疹、发热、关节疼痛、结膜炎等,因此尚未引起全球关注。直至2015年巴西地区的暴发流行,并逐渐呈现出许多相关联的严重并发症,包括新生儿小头畸形症、格林-巴利综合征等,随后世界卫生组织将寨卡病毒感染列为全球突发公共卫生事件。因此,建立和完善寨卡病毒早期检测和病原分型系统显得尤为重要。本研究首先通过分析亚洲型寨卡病毒全基因组核酸序列特征,用AlleleID 7.2软件设计型特异性探针和引物,建立亚洲型寨卡病毒的荧光定量PCR检测技术,构建标准曲线,通过特异性实验、敏感性实验以及重复性实验验证该方法的有效性。随后运用网络服务器及多种生物信息学分析软件,对寨卡病毒N S1蛋白B细胞表位进行系统性的生物信息学分析,运用蛋白质抗原理化性质、跨膜区及信号肽预测、二级结构、疏水性、抗原性、灵活性、表面可及性等多参数预测,筛选B细胞优势抗原表位。荧光定量PCR测试结果表明所设计的引物和探针特异性良好,对非洲型寨卡病毒、1-4型登革病毒、丙型肝炎病毒、基孔肯雅病毒以及流行性乙型脑炎病毒核酸检测无交叉反应;成功构建了标准曲线,其中相关系数R2=1,扩增效率Eff为102%;该方法灵敏度较高,最低病毒检测量可达3.415copies/μL;重复性实验结果显示各组Ct值变异系数均小于2%,表明所选方法稳定性和重复性良好。同时,通过多软件、多参数验证,最终从五条初筛的抗原表位多肽中确定两条最佳的B细胞抗原表位多肽,分别位于第253-266位(HNTREGYRT QMKGP)、第333-345位(MEIRPRKEPESNL)。本研究所建立的亚洲型寨卡病毒的荧光定量PCR技术高效、特异、灵敏度高,能够快速鉴定亚洲型寨卡病毒株,可用于亚洲型寨卡病毒感染患者的病原分型和临床早期诊断。同时,NS1蛋白作为可分泌至宿主细胞外的非结构蛋白,能刺激机体产生特异性抗体,可作为病毒感染的早期血清标志物,本研究所预测的抗原表位可为亚洲型寨卡病毒血清学检测技术的建立和疫苗的开发研制提供依据。