【摘 要】
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目的:通过壳聚糖(CS)微球/CD271抗体/聚多巴胺(PDA)涂层制备出一种功能化微球,并对这种微球捕获成人骨髓间充质干细胞(hBM-MSCs)及促细胞在其表面粘附增殖能力进行评估。方法
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目的:通过壳聚糖(CS)微球/CD271抗体/聚多巴胺(PDA)涂层制备出一种功能化微球,并对这种微球捕获成人骨髓间充质干细胞(hBM-MSCs)及促细胞在其表面粘附增殖能力进行评估。方法:1.通过高压静电场将壳聚糖溶液裂解为小液滴并利用氢氧化钠溶液固定为壳聚糖微球。将微球与多巴胺在弱碱性缓冲液中反应以在微球表面构建PDA涂层,随后引入生物素位点,并借助链霉亲和素-生物素间的特异性配对将生物素酰化的CD271抗体连接至微球表面,从而制备出CD271/PDA/CS微球。同时制备CD271/CS微球及空白CS微球作为对照。2.通过免疫荧光染色法及流式细胞法检测hBM-MSCs的CD271表达情况。3.将细胞进行Di I预染色,随后将微球与hBM-MSCs共培养5小时后采用40μm滤网滤去未捕获细胞。细胞捕获情况通过荧光显微镜及MTS检测进行观察评估。4.将捕获细胞后的微球培养21天,并通过DAPI/鬼笔环肽染色法及MTS检测评估细胞在各组微球表面的增殖情况。结果:1.亚微米级的壳聚糖微球被成功制得。经过PDA修饰后微球由透明变为黑色。荧光染色结果显示CD271抗体被成功连接至壳聚糖微球及PDA修饰的壳聚糖微球表面。2.CD271在hBM-MSCs中广泛表达,表达率高达97.9%。3.CD271/PDA/CS组及CD271/CS组均可捕获大量hBM-MSCs且两组间无明显统计学差异(P>0.05),同时捕获的细胞数量均明显多于空白壳聚糖微球组(P<0.05)。4.培养21天后CD271/PDA/CS组可观察到细胞在微球表面大量增殖。然而CD271/CS组中绝大多数被捕获的细胞会在最初一周内从微球表面掉落至培养皿表面,从而导致微球上细胞数量明显下降。结论:本实验成功制备PDA及CD271抗体修饰的壳聚糖微球,初步验证了可通过固定于微球表面的CD271抗体捕获周围环境中的hBM-MSCs,并可通过PDA涂层使捕获后的细胞粘附于微球表面并大量增殖。
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