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本文研究了冠心灵颗粒的制剂工艺及其质量标准,全文分为两部分:
第一部分,冠心灵颗粒制剂工艺研究。
研究方法:采用正交试验筛选提取工艺。以加水量(A)、浸泡时间(B)、提取时间(C)作为考察因素,以挥发油收率为考察指标,优选檀香、砂仁中的挥发油提取工艺。以醇浓度(A)、醇用量(B)、提取时间(C)和提取次数(D)为考察因素,以丹参酮ⅡA的含量为考察指标筛选丹参的乙醇提取工艺。以加水量(A)、提取时间(B)、提取次数(C)作为考察因素,以丹参素的含量为考察指标优选丹参、檀香和砂仁药味的水提工艺。
研究结果:通过正交试验筛选的最佳制备工艺条件为:(1)挥发油的提取:檀香、砂仁加12倍量水,浸泡1小时,提取9小时。(2)丹参醇提结果:根据实验所得最佳的条件为采用95%的乙醇,溶媒用6倍量,回流时间为2小时,提取次数为2次。(3)水提工艺最佳条件为加12倍量水,煎煮1次,煎煮3小时。(4)成型工艺为:醇提和水提干膏合并后加入5~6倍量的淀粉,加适量乙醇制粒,干燥。
研究结论:通过正交试验优选出最佳的冠心灵颗粒最佳制备工艺,该制备工艺稳定。
第二部分,利用薄层色谱法对冠心灵颗粒处方中丹参进行定性鉴别;建立了冠心灵颗粒中丹参素和丹参酮ⅡA的高效液相色谱含量测定方法。
研究方法:
1.鉴别方法的研究:采用薄层色谱法,选用合适的提取溶剂和方法,以及最适宜的固定相、展开系统、显色系统等,对处方中各味药材进行鉴别。
2.丹参酮ⅡA的含量测定:①提取:冠心灵颗粒加入一定量的甲醇超声提取20分钟后,补足减失的溶剂,过滤,取续滤液稀释到一定浓度,即得。②色谱条件:选择合适的固定相,调整流动相的组成、配比、流速以使丹参酮ⅡA峰与其它峰完全分离。③系统适用性试验:在已确定的色谱条件下,考察丹参酮ⅡA峰的分离度、理论板数、对称度。④标准曲线的制备:配制系列浓度的丹参酮ⅡA对照品溶液,分别进样测定峰面积,以丹参酮ⅡA对照品溶液浓度为横坐标,相应的峰面积为纵坐标分别绘制标准曲线。⑤最低检测限试验:逐步稀释丹参酮ⅡA对照品溶液,进样,直至丹参酮ⅡA色谱峰的峰高为噪声三倍。⑥稳定性试验:取供试品溶液分别放置0,2,4,6,8,24h后,按已确定的色谱条件测定峰面积。⑦精密度试验:取冠心灵颗粒,制备供试品溶液,按已确定的色谱条件重复进样5次,记录峰面积。⑧重复性试验:取同一冠心灵颗粒细粉5份,制备供试品溶液后,测定丹参酮ⅡA的含量。⑨加样回收率试验:依次取冠心灵颗粒细粉适量,加入丹参酮ⅡA对照品溶液,测定丹参酮ⅡA的含量。
3.丹参素的含量测定:①提取:冠心灵颗粒加入一定量的60%甲醇超声提取50分种后,补足减失的溶剂,过滤,取续滤液稀释到一定浓度,即得。②色谱条件:选择合适的固定相,调整流动相的组成、配比、流速以使丹参素峰与其它峰完全分离。③系统适用性试验:在已确定的色谱条件下,考察丹参素峰的分离度、理论板数、对称度。④标准曲线的制备:配制系列浓度的丹参素对照品溶液,分别进样测定峰面积,以丹参素对照品溶液浓度为横坐标,相应的峰面积为纵坐标分别绘制标准曲线。⑤最低检测限试验:逐步稀释丹参素对照品溶液,进样,直至丹参素色谱峰的峰高为噪声三倍。⑥稳定性试验:取供试品溶液分别放置0,2,4,6,8,24h后,按已确定的色谱条件测定峰面积。⑦精密度试验:取冠心灵颗粒,制备供试品溶液,按已确定的色谱条件重复进样5次,记录峰面积。⑧重复性试验:取同一冠心灵颗粒细粉5份,制备供试品溶液后,测定丹参素的含量。⑨加样回收率试验:依次取冠心灵颗粒细粉适量,加入丹参素对照品溶液,测定丹参素的含量。
研究结果:
1.鉴别方法的研究:丹参采用相应的薄层鉴别方法,薄层展开后均显示与对照药材和对照品相同的特异性斑点,分离效果好。
2.丹参酮ⅡA的含量测定:①提取:超声波振荡提取20min,冠心灵颗粒中丹参酮ⅡA可被完全提取。②最佳色谱条件:以十八烷基硅烷化硅胶为固定相,以甲醇-水(78:22)为流动相,检测波长为270nm,流速为1.0ml·min-1,进样量为20μL。③系统适用性试验:在上述色谱条件下,丹参酮ⅡA峰形良好,无杂质峰干扰,其理论板数以丹参酮ⅡA计不低于1000,对称因子为1.21,保留时间为15min左右,与相邻色谱峰的分离度均大于1.5。④标准曲线的绘制:丹参酮ⅡA浓度在2.58~12.90μg/ml范围内与峰面积有良好的线性关系,回归方程为Y=9.95×105X-1.5×105,相关系数r=0.9995(n=5)。⑤最低检测限:为3.21ng。⑥稳定性试验:样品溶液在24h内稳定。⑦精密度试验:重复进样5次后,峰面积的RSD为0.62%。⑧重复性试验:丹参酮ⅡA含量为11.00mg/袋,重复性良好。⑨加样回收率试验:样品的平均加样回收率为99.09%,RSD为0.64%。3丹参素的含量测定:①提取:超声波振荡提取50min,冠心灵颗粒中丹参素可被完全提取。②最佳色谱条件:以十八烷基硅烷化硅胶为固定相,以甲醇-0.5%醋酸溶液(13:87)为流动相,检测波长为280nm,流速为1.0ml·min-1,进样量为20μL。⑧系统适用性试验:在上述色谱条件下,丹参素峰形良好,无杂质峰干扰,其理论板数以丹参素计不低于1000,对称因子为1.12,保留时间为7min左右,与相邻色谱峰的分离度均大于1.5。④标准曲线的绘制:标准曲线的绘制:丹参素浓度在1.14~10.3μg/ml范围内与峰面积有良好的线性关系,回归方程为Y=6.3×105X-1.7×104,相关系数r=0.9992(n=5)。⑤最低检测限:为2.03ng。⑥样品稳定性试验:样品溶液在24h内稳定。⑦精密度试验:重复进样5次后,峰面积的RSD为0.68%。⑧重复性试验:丹参素含量为0.170mg/袋,重复性良好。⑨加样回收率试验:样品的平均加样回收率为99.98%,RSD为0.51%。
研究结论:
1.丹参的鉴别方法分离度好,特异性强,重现性好,可作为冠心灵颗粒的鉴别方法。
2.HPLC法测定丹参酮ⅡA及丹参素的含量,准确度高、精密度好、简便快速,可作为冠心灵颗粒中丹参酮ⅡA及丹参素的含量测定方法。