趋化因子CCL2 siRNA对胶质瘤细胞株U251、U373增殖的影响

来源 :昆明医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:doudouhuijia
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[目的]趋化因子CCL2在许多肿瘤中存在表达,在肿瘤的增殖、迁移、侵袭中发挥着重要的作用,CCL2在胶质瘤中的表达情况还不清楚,因此,本研究探讨趋化因子CCL2在胶质瘤细胞株中的表达情况,筛选出高表达CCL2的胶质瘤细胞株,通过CCL2 siRNA转染高表达CCL2的胶质瘤细胞株来探讨CCL2对胶质瘤增殖的影响,为进一步研究CCL2在胶质瘤中的作用机制奠定理论基础。[方法]1.采用 Real-time PCR 实验检测胶质瘤细胞株 T98G、U251、SHG44、U373、U87中CCL2mRNA情况,每种细胞株作为一个实验分组,每组重复检测3次,筛选出CCL2 mRNA高的细胞株;2.通过Western blot实验检测胶质瘤细胞株T98G、U251、SHG44、U373、U87中的CCL2蛋白表达量,每种细胞株作为一个实验分组,每组重复检测3次,筛选出高表达CCL2的胶质瘤细胞株;3.采用CCL2 siRNA转染高表达CCL2的胶质瘤细胞株U251、U373,并设置正常对照组和无关序列组,采用Real-time PCR实验检测胶质瘤细胞株中CCL2 mRNA情况;4.采用CCL2 siRNA转染高表达CCL2的胶质瘤细胞株U251、U373,并设置正常对照组和无关序列组,采用Western blot实验分别检测胶质瘤细胞株U251、U373中CCL2蛋白表达水平;5.采用CCL2 siRNA转染高表达CCL2的胶质瘤细胞株U251、U373,并设置正常对照组和无关序列组;采用MTT实验检测经CCL2 siRNA转染后的胶质瘤细胞株U251、U373增殖的变化情况。[结果]1.CCL2 mRNA的量在5种胶质瘤细胞株中存在差异,其中U251和U373细胞株中CCL2 mRNA水平明显高于T98G、SHG44及U87细胞株(***p<0.001);2.CCL2蛋白在5种胶质瘤细胞株中存在不同程度的表达,其中U251和U373细胞株中CCL2的蛋白表达水平明显高于T98G、SHG44及U87胶质瘤细胞株(***p<0.001);3.用CCL2 siRNA转染胶质瘤细胞株U251、U373后,与正常对照组和无关序列组相比,CCL2 siRNA转染组的CCL2 mRNA、CCL2蛋白表达水平明显受到抑制(***p<0.001);4.用CCL2 siRNA转染胶质瘤细胞株U251、U373后,与正常对照组和无关序列组相比,CCL2 siRNA转染组的U251、U373胶质瘤细胞株的增殖明显受到抑制(***p<0.001)。[结论]CCL2 蛋白及 CCL2 mRNA 在胶质瘤细胞株 T98G、U251、SHG44、U373、U87中存在不同程度的表达,其中胶质瘤细胞株U251和U373的CCL2表达水平显著高于T98G、SHG44及U87细胞株。用CCL2 siRNA转染高表达CCL2的胶质瘤细胞株U251、U373后,胶质瘤细胞的增殖受到明显抑制,这表明CCL2可能参与了胶质瘤增殖的调节过程。总之本研究为进一步采用胶质瘤细胞株U251、U373来研究CCL2在胶质瘤中的作用机制奠定了理论基础。
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