第一部分DACH1抑制乳腺癌生长,且DACH1与CD44的表达呈负相关目的:作为视网膜决定基因网络(RDGN)的重要成员,DACH1是一个关键的细胞命运决定因子。据报道,DACH1失调可导致乳腺肿瘤的发生、侵袭和转移。然而,对于DACH1在乳腺癌中抗肿瘤作用的确切的分子机制目前仍缺乏全面深入的理解,CD44是一种跨膜糖蛋白,为细胞外基质成分透明质酸的受体。据报道,CD44与乳腺癌的发生发展有关,但是对于其与乳腺癌的临床病理特点和预后之间是否存在关联仍有争议。在本项研究中,我们主要综合评价DACH1和CD44的表达与乳腺癌的临床病理特点和预后之间的关系,并探索DACH1和CD44与上皮-间充质转化(EMT)标志物、肿瘤干细胞(CSCs)标志物和增殖相关基因之间是否存在相关性。此外,我们还验证DACH1是否抑制乳腺肿瘤的生长,并且进一步探索DACH1是否影响乳腺癌中CD44的表达。方法:我们利用乳腺癌GEO数据进行荟萃分析,利用癌症基因图谱(TCGA)数据分析以及乳腺癌组织芯片免疫组织化学(IHC)分析,以综合评价DACH1和CD44的表达与乳腺癌的临床病理特点和预后之间的关系。我们还利用乳腺癌GEO数据(GSE20685)和乳腺癌细胞系数据评价DACH1和CD44与EMT标志物、CSCs标志物和增殖相关基因之间的相关性。此外,我们构建DACH1过表达的乳腺癌细胞系和相应的裸鼠移植瘤模型,验证DACH1对乳腺癌生长的抑制作用并进一步探索DACH1对乳腺癌中CD44表达的影响。结果:人乳腺癌组织中和分化程度较低的乳腺癌组织中的DACH1的表达分别低于正常乳腺组织和分化程度较高的肿瘤组织。Luminal型乳腺癌组织中的DACH1的表达高于三阴性乳腺癌(TNBC)组织,而Luminal型肿瘤组织中的CD44的表达低于TNBC。相关性分析显示,DACH1的m RNA表达与EMT标志物、CSCs标志物和增殖相关基因呈负相关,而CD44的m RNA水平与这些基因呈正相关。在m RNA水平和蛋白水平上,DACH1过表达的乳腺癌细胞系中CD44、Fibronectin和Vimentin的表达均显著低于对照组乳腺癌细胞。裸鼠移植瘤组织IHC分析显示,DACH1过表达的移植瘤组织中的CD44、Myc、Sox2、Fibronectin、Vimentin、表皮生长因子受体(EGFR)和Ki-67的表达均显著低于对照组。此外,DACH1过表达显著抑制裸鼠移植瘤的生长。乳腺癌生存分析结果显示,DACH1 m RNA高表达与较好的总生存期(OS)、无复发生存期(RFS)和无转移生存期(MFS)有关,而CD44高表达与较差的OS和MFS有关。结论:我们的结果提示,DACH1和CD44均与乳腺癌的临床病理特点密切相关。DACH1与CD44的表达呈负相关,且DACH1抑制乳腺癌生长。此外,DACH1低表达和CD44高表达均与乳腺癌病人的不良预后有关。第二部分SIX的表达水平与乳腺癌的临床分期、分子分型和预后相关目的:SIX是RDGN网络的另一个关键成员。SIX家族成员包括SIX1、SIX2、SIX3、SIX4、SIX5和SIX6。据报道,SIX1可通过激活细胞外信号调节激酶和转化生长因子-β信号通路增加CSCs,且SIX1高表达与Luminal型乳腺癌患者预后不良有关。SIX2可通过调节Sox2和E-cadherin的表达促进肿瘤转移。SIX3则在多种肿瘤中表现为一个抗肿瘤因子。目前,SIX4、SIX5和SIX6在乳腺癌中的作用甚少被报道。在本研究中,我们分析SIX家族成员的表达与乳腺癌患者的临床病理特点之间是否存在关联,并评价SIX家族成员在乳腺癌中的预后价值。方法:我们利用乳腺癌TCGA数据进行统计学分析,评价SIX的表达水平与乳腺癌的分期、激素受体状态和分子分型之间关系。另外,我们还利用公共数据平台进行SIX家族成员在乳腺癌中的生存分析。结果:乳腺癌组织中的SIX1-4的m RNA表达水平显著高于癌旁组织。III-IV期的乳腺肿瘤中SIX1和SIX4的m RNA水平略高于I-II期的肿瘤组织,而III-IV期的肿瘤组织中的SIX3 m RNA水平低于I-II期的癌组织。雌激素受体(ER)阳性的乳腺肿瘤组织中SIX1和SIX4的m RNA表达高于ER阴性的肿瘤组织,而ER阳性的肿瘤中SIX2、SIX3和SIX6的m RNA水平显著低于ER阴性的肿瘤。孕激素受体(PR)阳性的乳腺肿瘤组织中的SIX2、SIX3和SIX6的m RNA表达低于PR阴性的肿瘤组织。此外,SIX家族成员的m RNA水平还与乳腺癌的分子分型和预后相关。结论:我们的分析提示,SIX家族成员的表达水平与乳腺癌的分期、激素受体状态、分子亚型和预后密切相关。第三部分EYA2与乳腺癌的分子分型相关并预示预后不良,且促进乳腺癌细胞增殖目的:EYA2是一个转录激活因子,其对于器官发育至关重要,但EYA2的异常调节已在多种人类肿瘤中被报道。然而,对于EYA2在乳腺癌中的作用仍然缺乏充分的认识。在本项研究中,我们综合评价EYA2是否与乳腺癌的临床病理特点及预后相关,并探索EYA2是否影响乳腺癌细胞的增殖。方法:我们进行乳腺癌GEO数据的荟萃分析、TCGA数据的表达分析和乳腺癌组织芯片的IHC分析,以综合评价EYA2的表达是否与乳腺癌的分化程度、激素受体状态和分子分型相关。我们还利用GSE25066数据进行相关性分析,以探索EYA2的m RNA水平与间质性标志物、CSCs标志物和细胞增殖相关基因之间是否存在相关性。此外,我们还构建乳腺癌EYA2过表达细胞系,并通过克隆形成实验和Ed U实验探索EYA2过表达是否影响乳腺癌细胞增殖以及通过蛋白质免疫印迹实验和细胞免疫荧光实验检测EYA2过表达是否影响增殖相关蛋白的表达水平。最后,我们还利用公共数据平台进行EYA2的生存分析。结果:乳腺肿瘤中的EYA2的m RNA表达低于正常乳腺。分化差的乳腺肿瘤组织中的EYA2的m RNA表达高于分化较好的癌组织。在m RNA水平和蛋白水平上,ER阳性和PR阳性的癌组织中的EYA2的表达分别低于ER阴性和PR阴性的肿瘤组织。TNBC中的EYA2的表达水平显著高于Luminal型乳腺癌。相关性分析显示,EYA2的m RNA水平与TNBC标志物、间质标志物、CSCs标志物和增殖相关基因之间均呈正相关。EYA2过表达促进乳腺癌细胞增殖,且上调表皮生长因子受体、增殖细胞核抗原、细胞周期蛋白E和Y-框结合蛋白1的表达。此外,EYA2高表达是乳腺癌患者的不良预后因素。结论:我们的研究提示,TNBC高表达EYA2,且EYA2高表达与乳腺癌患者预后不良有关。此外,EYA2促进乳腺癌细胞增殖并且上调增殖相关蛋白的表达水平。