β-受体激动剂是一类具有苯乙醇胺结构的药物,广泛用于治疗支气管疾病。一系列动物实验表明在动物饲养中当β-受体激动剂用药量超过推荐治疗剂量的5~10倍时可提高饲料转化率,促进动物生长,因此曾被广泛滥用于动物饲养过程。β-受体激动剂在动物体内造成蓄积性残留,通过食物链进入人体。人类食用β-受体激动剂残留量较高的动物源性食品后对肾脏、肝脏等器官均产生毒副作用,出现肌肉震颤、疼痛、心悸等中毒症状,严重危害人类健康。因此需要对食品中β受体激动剂残留进行监控,以确保动物源性食品的质量安全。目前对β-受体激动剂的检测研究对象多集中在畜禽类组织、毛发、尿液及饲料等方面,对水产品中β-受体激动剂残留研究甚少。检测方法存在同时测定β-受体激动剂种类少,很多禁用β-受体激动剂未纳入检测范畴,以及涉及的样品种类少等问题。因此,为实现对水产品中β-受体激动剂残留全面监管,控制违法滥用β-受体激动剂的行为,急需建立适合多种水产品样品基质及同时测定多种类β-受体激动剂药物残留的检测方法,提高检测效率,为水产品中多种β-受体激动剂残留监管、尤其是禁用β-受体激动剂的监管提供技术支撑。本研究首先以河鳗为对象,选择典型β-受体激动剂沙丁胺醇、莱克多巴胺和妥布特罗,通过室内养殖用药实验,制备了含有沙丁胺醇、莱克多巴胺和妥布特罗三种β-受体激动剂的河鳗阳性样品;利用阳性样品研究了三种β-受体激动剂在河鳗肌肉中存在的形态以及β-受体激动剂由结合态转化为游离态的方法,为β-受体激动剂在水产品中残留量测定方法的研究提供理论基础。其次利用液相色谱-串联质谱技术开展了水产品中多种β-受体激动剂残留同时检测的方法研究,通过仪器分析条件的优化,提取剂的筛选及净化方法的探索,最终建立了水产品中18种β-受体激动剂残留检测方法。该方法具有操作简单、灵敏度高、检测种类多、适用性强等优点。最后利用建立的β-受体激动剂残留检测方法对流通领域的水产品进行了筛查,考察流通领域水产品的安全性。本项目研究结果如下:(1)采用实验室养殖给药方式制备了含有沙丁胺醇、莱克多巴胺和妥布特罗三种β-受体激动剂的河鳗阳性样品。三种β-受体激动剂在河鳗肌肉中主要以结合态和游离态二种形式存在,沙丁胺醇、莱克多巴胺和妥布特罗在河鳗肌肉中结合态所占的比例分别为79.1%、89.0%和73.9%。(2)利用阳性样品,研究了将结合态β-受体激动剂转化为游离态β-受体激动剂的两种水解方式,包括酶解水解方式的水解温度和水解时间,酶解时酶解剂的p H及添加的酶量,盐酸酸解中盐酸的浓度等,并对不同的水解方法进行了对比,确定了最佳水解方案。最佳的水解方法及最佳水解条件为:37℃下,在0.2 mol/L乙酸铵水溶液中添加50.0μLβ-葡萄糖醛酸甙酶/芳基硫酸酯酶酶解16 h。(3)利用液相色谱-串联质谱技术,建立水产品中18种β-受体激动剂残留检测方法。最佳仪器分析条件为:利用色谱柱CAPCELL PAK MGⅡC18(2.0mm I.D×100 mm,3μm)在5.0 mmol/L乙酸铵水溶液(含0.2%甲酸)和0.1%甲酸-乙腈流动相下采用分段梯度洗脱将18种化合物完全分离;采用电喷雾离子源正离子扫描模式检测(ESI+),内标法定量。方法检出限(LOD)为0.25~0.50μg/kg,定量限(LOQ)为0.25~0.50μg/kg。18种β-受体激动剂在0.20~200.00μg/L范围内线性相关系数>0.991,18种β-受体激动剂在0.50μg/kg~20.00μg/kg的添加水平下加标回收率为70.0%~115.0%,批内相对标准偏差小于12.9%,批间相对标准偏差小于13.5%。(4)采用已建立的方法对上海、江苏养殖基地和上海、江苏、四川和拉萨流通市场上水产品进行检测,对水产品中β-受体激动剂残留现状进行了评估。检测结果显示:47个样品中3个样品中检测到β-受体激动剂,检出率为6.3%。其中河鳗样品含有莱克多巴胺、沙丁胺醇和妥布特罗3种禁用β-受体激动剂,残留检测量分别为2.10μg/kg、3.00μg/kg和2.90μg/kg;草鱼肌肉中含有莱克多巴胺0.38μg/kg;大黄鱼样品中含有克伦特罗和克仑潘特,残留量分别为1.26μg/kg、0.29μg/kg,因此需要对水产品中β-受体激动剂残留进行安全监测。