【摘 要】
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目的:探究HA15在去势小鼠体内外实验中是否通过影响内质网应激(Endoplasmic Reticulum stress,ERS)信号通路的关键蛋白热休克蛋白5(Heat Shock Protein 5,HSPA5)来改变成骨/成脂的分化进而寻找治疗骨质疏松症的新方法。方法:(1)培养小鼠骨髓间充质干细胞系C3H10细胞,并通过瞬时转染干扰及过表达HSPA5的表达,并在标准条件下培养后应用免疫荧光
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目的:探究HA15在去势小鼠体内外实验中是否通过影响内质网应激(Endoplasmic Reticulum stress,ERS)信号通路的关键蛋白热休克蛋白5(Heat Shock Protein 5,HSPA5)来改变成骨/成脂的分化进而寻找治疗骨质疏松症的新方法。方法:(1)培养小鼠骨髓间充质干细胞系C3H10细胞,并通过瞬时转染干扰及过表达HSPA5的表达,并在标准条件下培养后应用免疫荧光染色与Real-time PCR检测ALP、BMP2、Col1a1、Osterix、RUNX2、OCN等成骨分化指标及a P2、C/EBPα、PPARγ、adiponectin等成脂分化指标的表达情况,并行茜素红染色评价矿化能力。(2)将应用HA15干预与对照组的C3H10细胞,分别应用免疫荧光染色、茜素红染色及Real-time PCR再次检测以上成骨/成脂指标的表达情况,进而分析HA15的相关作用。(3)使用4周龄大小C57BL/6雌性小鼠26只,随机分做假手术组与去势组两组。喂养12周后,予分别随机抽样小鼠各5只并行micro-CT检测造模成功情况,再将剩余16只去势组小鼠随机分为骨髓腔注射生理盐水组及骨髓腔注射HA15药物组两组,并分别每周每组小鼠各注射药物1次,共进行8次注射。两个月后将26只小鼠进行HE染色、micro-CT检测、免疫荧光实验等处理。观察组织病理学改变及ERS关键蛋白和下游相关成骨/成脂分化及相关指标的变化情况。结果:(1)干扰HSPA5基因表达后促进ALP、BMP2、Col1a1、Osterix、RUNX2、OCN等成骨指标的分化,抑制a P2、C/EBPα、PPARγ、adiponectin等成脂分化;过表达HSPA5表达则结果相反;(2)加入HA15组可抑制C3H10细胞中HSPA5的表达,并促进成骨相关指标分化,抑制成脂相关指标分化。(3)OVX(去势组)造模骨质疏松中HSPA5的表达增加,并且HSPA5可表达于成骨细胞和成脂肪细胞中。经过HA15注射后的去势小鼠骨质疏松症状可明显改善,而对照组注射生理盐水组未见明显变化,且成骨细胞的自噬与凋亡可能参与其中。结论:ERS通路关键蛋白HSPA5在骨质疏松症中表达明显增加,应用HA15治疗后可减少HSPA5的表达,抑制ERS通路,进而影响骨髓间充质干细胞成骨/成脂分化的能力,并通过增加成骨细胞的自噬作用,降低其凋亡作用,从一定程度上缓解骨质疏松的发生发展。
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