单链抗体酶人源化的研究

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利用计算机模拟技术对比鼠源抗体与人源相似抗体的结构,并对鼠源抗体进行定点突变,改造其一级结构,使其尽可能与人源抗体相似而减小其抗原性.由于抗体CDR附近的一些氨基酸对于该区的稳定非常重要,一旦改变,很可能造成CDR的结构改变,进而影响抗体的活性,所以我们对这些氨基酸与人相似抗体该部位氨基酸同时保留,这样就形成了一个容量约为500的小型人源化单链抗体库,然后按细菌的密码子设计出整个单链抗体库的基因序列,再将该基因库连入噬菌粒载体,通过噬菌体展示筛选技术筛选亲和活性高的克隆.我们将筛选得到的基因克隆转移到适当的可溶性表达载体中,转化大肠杆菌进行表达,收集并裂解菌体,采集上清,利用Ni<2+>金属螯合树酯对样品进行纯化处理(亲和层析),然后利用Western Blotting,ELISA,点印记(dot blotting)等方法对目的蛋白进行鉴定.利用化学修饰方法对经鉴定确认的目的蛋白进行硒化,并用间接法测定其GPX活性.
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