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蛋白质酪氨酸磷酸酶(Protein Tyrosine Phosphatases, PTPs)在细胞信号传导中起重要作用,是信号传导的重要调节因子,且与人类各种疾病关系密切。由于一些人类重大疾病,如癌症、糖尿病、血液病等正是由于PTPs的基因突变或异常表达造成的,如果能够筛选出针对某一PTPs高效、专一的抑制剂,则能够为今后PTPs作为新的治疗靶点进行药物研发提供新途径。在已发现的蛋白质酪氨酸磷酸酶中,PTP-MEG2是由593个氨基酸组成的胞内酶。本课题构建了含有His标签的PTP-MEG2全酶的原核表达载体并在大肠杆菌中进行了表达,经过Ni柱亲和层析法处理,我们纯化了单一组分的重组PTP-MEG2。通过再折叠缓冲液透析去除变性剂尿素,纯化后的酶蛋白又恢复了活性,该酶复性后可有效地对PTPs底物对-硝基苯基磷酸进行去磷酸,比活达2000U/mg。同时以无活性的酶来免疫BALB/c小鼠,制备的单克隆抗体具有很高的灵敏度和专一性,用蛋白电泳分析发现,PTP-MEG2在小鼠的许多组织里都有表达。这些结果说明,我们建立了高效的大批量纯化PTP-MEG2的方法。此外,我们制备了能有效检测各种组织中内源表达酶的高特异性单抗。经ECL检测,纯化后抗体效价可达到1:5000(V/V);灵敏度为0.1 ng。经Western Blotting检测,抗体纯度可达到90%以上,符合免疫实验要求。为进一步研究PTP-MEG2的活性和功能奠定了坚实的基础。为了筛选高效专一的人ΔMEG2催化结构域的抑制剂,本研究以ΔPTP1B、ΔTCPTP、ΔSHP1、ΔSHP2、ΔYOPH和GST-HePTP为对照,通过体外酶反应动力学实验,对多种天然组分的抑制效果进行了测定,筛选出了针对ΔMEG2高效专一的抑制剂,并在细胞水平进一步验证了ΔPTPs抑制剂对细胞信号传导的影响,本研究使PTPs作为某些疾病新的治疗靶点,为新药研发和应用开辟了新途径。