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第一部分HIF-1α/BCL-2在SACC中的表达以及与临床病理特征的关系目的:乏氧诱导因子-1α(Hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)在很多癌症患者的预后及治疗的反应性方面扮演着重要角色,本研究观察HIF-1α及B淋巴细胞因子-2(B-cell lymphoma-2,BCL-2)在涎腺腺样囊性癌(Salivary gland adenoid cystic carcinoma,SACC)中的表达情况,并分析其与临床病理特征间的相互关系。方法:收集来自安徽医科大学第一附属医院的56例SACC患者的手术切除蜡块,通过免疫组织化学染色,观察HIF-1α和BCL-2的表达。然后,通过半定量免疫反应性积分(Semiquantitatively immunoreactive scoer,IRS)的方法分析SACC中HIF-1α和BCL-2表达水平。结果:在36例(64.3%)中存在HIF-1α的表达(IRS≥3),且表达水平于TNM分期紧密相关(P=0.03),同时,HIF-1α的表达水平于SACC的组织来源也具有统计学关联(P=0.004)。在55例(98.2%)中发现有BCL-2的表达,其中44例(78.6%)呈强阳性。统计发现,HIF-1α的IRS于BCL-2具有相关性(β=0.236,P=0.013),并且HIF-1α于TNM分期的相关性依赖于BCL-2的高表达(Z=2.43,P=0.015)。结论:通过检测HIF-1α的蛋白表达将有助于SACC患者的预后评价。第二部分HIF-1α对SACC细胞放射敏感性的影响目的:涎腺腺样囊性癌(salivary ade noid cystic carcinoma,SACC)是唾液腺上皮源性的恶性肿瘤。术后复发和远处转移是引起SACC患者死亡的主要原因,如何有效地控制肿瘤的复发与转移,对于提高患者的生存率至关重要。以往的临床研究认为SACC细胞具有较强的放射抵抗性,因此,对SACC放射敏感性的研究意义重大。HIF-1是一种在实体肿瘤组织中常见的转录因子,由α和β亚基组成的异源二聚体。通常情况下HIF-1β表达稳定,HIF-1α受到氧浓度的调节,抑制HIF-1α的表达可以有效限制肿瘤的生长,同时,HIF-1α的表达水平升高可使多种肿瘤细胞对放疗产生抵抗作用。BCL-2为一种抗凋亡基因,是肿瘤细胞放射敏感性的重要靶分子。研究发现在肾脏等恶性肿瘤中,HIF-1α与BCL-2具有明显的相关性,并与患者的愈后不良有关。本研究的目的是构建高表达HIF-1α的SACC细胞,观察SACC中是否存在HIF-1α/BCL-2信号通路,以及HIF-1α在SACC中的表达对肿瘤细胞放射敏感性的影响。方法:用高表达HIF-1α的重组质粒和EGFP载体对ACC-2细胞进行转染获得的常氧下高表达HIF-1α的ACC-2/M-HIF-1α细胞、乏氧下高表达HIF-1α的ACC-2/W-HIF-1α及对照载体细胞ACC-2/F。采用RT-PCR和Western Blot的方法检测细胞中HIF-1α的蛋白及m RNA的表达水平,通过在不同处理下对4中细胞进行不同剂量的X线照射后观察细胞内HIF-1α和BCL-2蛋白表达水平并通过增殖实验观察细胞的增殖能力。在常氧环境中,对4种细胞进行0、2、3、5Gy的X线照射,采用克隆形成的方法观察和计算各细胞的存活分数。结果:成功转染并筛选出高表达HIF-1α的SACC细胞,并经RT-PCR检测结果显示,ACC-2/M-HIF-1α和ACC-2/W-HIF-1α细胞中HIF-1α的m RNA表达水平明显升高(P<0.05)。采用Co Cl2化学模拟乏氧后经Western Blot检测结果显示,4种细胞中HIF-1α及BCL-2表达水平均有上升,而经YC-1显著降低。然后,进行了不同预处理并经不同剂量X线照射后,通过Western Blot检测结果显示,常氧条件X线照射下,细胞内HIF-1α和BCL-2的表达水平升高,而在乏氧高剂量照射后会有降低,YC-1处理后的结果类似。通过细胞增殖实验,结果显示ACC-2/MHIF-1α的倍增时间(Td)明显高于其他3种细胞,4种细胞均表现出受照射倍增时间延长的现象。通过集落形成实验可以观察到,ACC-2/M-HIF-1α的D0值高于其他3种细胞。结论:本研究结果表明,细胞内HIF-1α的高表达可以增加SACC细胞的放射抵抗性,并且HIF-1α和BCL-2的相关性同样存在于SACC中。