血浆吲哚的电化学检测新方法研究及临床应用

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目的:1.基于金磁纳米复合物(Gold magnetic nanocomposite,Au/Fe3O4)信号放大策略建立一种灵敏的吲哚电化学检测新方法。2.利用氮掺杂有序介孔碳(Nitrogen-doped ordered mesoporous carbon,NOMC)-壳聚糖(Chitosan,CS)修饰丝网印刷碳电极(Screen-printed carbon electrode,SPCE),构建一种快速、灵敏检测血浆吲哚的电化学传感器。3.使用基于NOMC-CS/SPCE的电化学传感器测定多囊卵巢综合征(Polycystic ovary syndrome,PCOS)患者和健康育龄期女性血浆中的吲哚浓度,并进一步探究吲哚在生理和疾病状态下的变化和作用。方法:1.利用高能电子束辐照法成功合成了Au/Fe3O4。首先,利用Au-S键将4-氨基苯硫酚(4-aminothiophenol,4-ATP)连接在Au/Fe3O4表面,形成Au/Fe3O4@ATP。接下来,使其与NaNO2发生重氮化反应生成重氮化物。最后,该重氮化物与血浆基质中的吲哚进行偶合反应生成Au/Fe3O4@ATP-azo-indole。将该产物修饰于SPCE表面,室温下干燥后,连接至电化学工作站,电极下放置磁铁富集产物,滴加支持电解质溶液后用示差脉冲伏安法(Differential pulse voltammetry,DPV)进行测定。2.将NOMC加入壳聚糖溶液中进行超声分散,制备黑色、均一的NOMC-CS分散液,然后将其滴涂于SPCE表面,室温下干燥备用。对血浆进行乙醚液-液萃取处理,将萃取液旋干后复溶于PBS溶液中形成工作液,再把工作液滴加于SPCE表面,进行DPV检测。3.采用基于NOMC-CS/SPCE的电化学传感器对48例PCOS患者和20例健康育龄期女性血浆中的吲哚浓度进行测定,并采集各研究对象的临床信息和相关实验室检测指标,再对数据进行统计学分析,挖掘数据间的关系并探讨临床意义。结果:1.采用基于Au/Fe3O4信号放大策略的电化学方法测得血浆基质中吲哚的线性范围为0.50120.00μg/L,回归方程为ΔI(μA)=0.0202 c(μg/L)+0.8121(R2=0.9923),检测限(Limit of detection,LOD)为0.10μg/L(S/N=3)。日内、日间精密度的相对标准偏差分别为4.9%和8.2%,回收率为97.2%105.4%。2.采用基于NOMC-CS/SPCE的电化学传感器测定血浆吲哚浓度。吲哚的线性范围为1.0150.0μg/L时对应的回归方程为y=0.0189 x+0.6652(R2=0.9962),吲哚的线性范围为1.020.0μg/L时对应的回归方程为y=0.0217 x+0.6442(R2=0.9975),LOD为0.2μg/L(S/N=3)。日内、日间精密度的相对标准偏差分别5.8%和7.5%,回收率为95.0%103.2%。所建立的方法与高效液相色谱-荧光检测法(High performance liquid chromatography-fluorescence detection,HPLC-FLD)具有较好的相关性(r=0.752,p<0.001)。3.采用基于NOMC-CS/SPCE的电化学传感器分析PCOS患者和健康育龄期女性血浆中的吲哚浓度。结果表明,两组间的吲哚水平具有统计学差异。与健康对照组相比,PCOS组血浆吲哚水平显著升高。受试者工作特征(Receiver operating characteristic,ROC)曲线结果显示血浆吲哚对PCOS具有较高的诊断效能。灵敏度为77.1%,特异性为95.0%,曲线下面积(Area under the curve,AUC)可达0.904。回归分析显示,吲哚是PCOS发生的危险因素(Odds ratio(OR)=4.848,p<0.001)。按是否存在胰岛素抵抗状态将PCOS患者分为胰岛素抵抗(Insulin resistance,IR)组和非胰岛素抵抗(Non-insulin resistance,Non-IR)组,结果显示两亚组的生理周期、总胆汁酸(Total bile acid,TBA)、部分血糖检测指标、全部胰岛素检测指标、胰岛素抵抗指数(Homeostasis model assessment of insulin resistance,HOMA-IR)和胰岛β细胞功能指数(Homeostasis model assessment ofβ-cell function,HOMA-β)具有统计学差异。结论:1.基于Au/Fe3O4信号放大策略的电化学分析法实现了血浆基质中吲哚的灵敏、低成本的检测,该方法为传统实验室的吲哚检测提供了一种新方法。2.基于NOMC-CS/SPCE构建了一种检测血浆中吲哚含量的电化学传感器。该传感器具有简便快捷、稳定性和重复性较好、抗干扰力较强等优点,为临床血浆吲哚的检测提供了一种新思路。3.PCOS患者体内存在吲哚代谢紊乱,进一步分析发现吲哚与胰岛素抵抗具有相关性,提示吲哚可能与PCOS疾病的发生、发展具有相关性。
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