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目的Rap1是一种在真核生物广泛表达的GTP结合蛋白，参与着体内多种生物学活动。不同于其它GTP结合蛋白的是其在人胚肾以及部分肿瘤细胞中可被诱导入核。在之前研究中我们已经证实其在不育男性生精细胞中表达升高。推测其可能参与调节生精细胞的增殖和分化，调控精子的发生，为进一步明确Rap1在生精过程中的作用，我们研究了其在大鼠睾丸发育以及生精细胞凋亡模型中的表达，对其可能的作用机制进行了探讨。方法1.使用不同固定试剂固定大鼠生精细胞各发育阶段（1，7，15，24，37，50和90天）的睾丸组织，进行免疫组织化学染色，了解Rap1在发育中的表达规律并分析固定试剂对其表达的影响。结合使用蛋白质免疫印迹研究Rap1在总体睾丸的表达水平。2.使用单剂量MAA(650mg/kg)腹腔注射建立大鼠精母细胞凋亡模型，采用免疫组织化学、TUNEL、蛋白质免疫印迹杂交研究Rap1在生精细胞凋亡过程中表达的变化，并使用间接免疫荧光、免疫共沉淀研究Rap1与NF-κB的相互作用关系。结果1.在Bouin’s液固定的大鼠睾丸组织中，P1和P7生精细胞有Rap1表达，从P15开始，Rap1表达于精母细胞核旁的高尔基体，随着大鼠继续发育，Rap1在高尔基体表达逐渐增强，并在成年后大鼠精母及圆形精子细胞核旁出现Rap1表达。Rap1表达随着粗线期精母细胞高尔基体的增大而增高。2.在多聚甲醛固定的大鼠睾丸组织中，P1生殖母细胞和P7精原细胞的胞核强表达Rap1，而P7每个生精小管的阳性细胞数显著低于P1(P <0.001)。Rap1在P15大鼠生精小管内主要表达于精原细胞胞浆。在P24、P37、P50表达在晚粗线期精母细胞核内。在P90大鼠睾丸中，Rap1在各种细胞无显著着色区域。在睾丸除生精细胞以外的其它细胞未发现Rap1表达。3.在睾丸组织蛋白免疫印迹研究中，Rap1在P1仔鼠睾丸组织裂解物中的表达显著高于P7(P <0.01)。其它各时间点表达无显著差异。4.在MAA腹腔注射6h大鼠睾丸中，Rap1、NF-κB以及TUNEL染色阳性的粗线期精母细胞在VIII-XIV期小管内开始出现，到12h及24h阳性细胞数明显增多。睾丸组织蛋白免疫印迹研究提示，各处理组与对照组间睾丸Rap1及NF-κB的表达量无显著差异。5. Rap1间接免疫荧光加TUNEL染色提示：MAA处理后，各时间点在VIII-XIV期生精小管可见Rap1与TUNEL细胞核内共定位的细胞百分比分别为19.1%、57.7%、67.4%，各处理组Rap1+TUNEL阳性细胞数显著高于对照组(P <0.01)。6. Rap1和NF-κB双标记间接免疫荧光提示在实验组，两种蛋白在VIII-XIV期粗线期精母细胞核内共定位细胞百分率分别为75.6%、91.8%、94.6%，高于RAP1与TUNEL共表达的百分比。对MAA处理24h及对照大鼠睾丸蛋白进行NF-κB与Rap1免疫共沉淀分析提示，MAA处理组NF-κB结合的蛋白中Rap1的表达明显强于对照组。结论1. Rap1在大鼠睾丸发育过程中表达于生精细胞的胞核和高尔基体，可能参与了睾丸发育过程中生精细胞的基因调控。固定试剂的选择会影响Rap1的免疫组化显色结果。2. Rap1和NF-κB在MAA诱导的凋亡的生精细胞中表达明显升高，并且均发生入核并共定位，免疫共沉淀结果提示两种蛋白存在相互作用，提示Rap1可能与NF-κB相互作用介导生精细胞凋亡。