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目的:观察补肾化坚方联合针刺治疗多囊卵巢综合征(PCOS)模型大鼠的疗效,研究PCOS大鼠卵巢内异常的血管生成,探讨针药联合治疗对卵巢组织血小板反应蛋白-1(TSP-1)及内皮抑素(ES)表达的影响,阐明针药联合治疗PCOS的作用及可能的机制。方法:选6周龄SPF级雌性SD大鼠60只,随机分为6组:空白组,模型组,针刺组,中药组,针药组,西药组(达英-35),每组10只。除空白组外其余采用1mg/(kg·d)来曲唑加l%羧甲基纤维素灌胃30天制备PCOS大鼠模型,造模20天后对大鼠进行连续10天的阴道涂片以判断动情周期变化。造模成功后,对各组进行干预治疗。其中,空白组常规饲养;模型组大鼠绑缚后灌胃生理盐水;针刺组予以电针治疗,针刺穴位选“三阴交”“关元”“足三里”“子宫穴”,同时灌胃生理盐水;中药组绑缚后予以补肾化坚方灌胃治疗;针药组按上述穴位电针治疗后予以补肾化坚方灌胃;西药组予以达英-35灌胃治疗。连续治疗30天,每周记录大鼠体重,大鼠处死后将卵巢称湿重,腹主动脉取血后分离血清,采用ELISA法检测血清睾酮(T)、促卵泡刺激素(FSH)、黄体生成素(LH)、抗苗勒式管激素(AMH)含量,HE染色后镜下观察卵巢组织形态变化,免疫组化(SP)法检测各组大鼠卵巢中血小板反应蛋白-1(TSP-1)、内皮抑素(ES)的表达及定位,蛋白免疫印迹(Western Blot)法检测各组大鼠卵巢组织TSP-1、ES蛋白表达量。结果:1.各组大鼠体质量增量及卵巢相对质量:与空白组相比,模型组体质量增量、卵巢相对质量显著升高(P<0.01);与模型组相比,干预后各治疗组体质量增量、卵巢相对质量降低(P<0.01)。各干预组之间进行比较,西药组体质量增量低于空白组大鼠,卵巢相对质量也降低最为显著,其余各干预组与西药组相比有统计学差异(P<0.05)。2.各组大鼠血清性激素水平:与空白组相比,模型组大鼠血清T、LH、AMH含量、LH/FSH比值显著升高(P<0.01);与模型组相比,干预治疗后各组血清T、LH、LH/FSH比值降低,其中针药组、西药组降低显著(P<0.01),两组相比除血清T含量其余无显著差异(P>0.05),西药组较针药组血清T含量降低幅度大;针刺组与模型组相比AMH含量无统计学差异(P>0.05),除针刺组外其它各干预组血清AMH含量较模型组显著降低(P<0.01),各治疗组中针药组降低最为显著。各组FSH水平无显著差异(P>0.05)。3.各组大鼠卵巢组织病理改变:HE染色后镜下可见空白组卵泡颗粒细胞呈多层,较厚,形态完整,排列整齐,卵巢内可见优势卵泡;模型组镜下可见较多早期发育的小卵泡和闭锁卵泡,无成熟卵泡及黄体,并出现多个囊状扩张卵泡,未见排卵迹象,间质内小血管增加;针刺组大鼠卵巢可见不同发育阶段的卵泡,可见优势卵泡及多个黄体,卵巢内未见囊状扩张卵泡;中药组大鼠卵巢内仍然可见囊状扩张卵泡,其颗粒细胞层排列不规则,还可见黄体及初级卵泡;针药组内未见囊状扩张卵泡,可见优势卵泡,以及初级卵泡,卵巢间质内小血管减少;西药组可见初级卵泡,以及发育成熟的卵泡。4.各组大鼠卵巢组织TSP-1、ES的表达及定位:分析免疫组化病理切片,发现各组卵巢组织中均可见TSP-1、ES阳性表达。其中TSP-1主要表达于窦卵泡的颗粒细胞及黄体中。与空白组相比,模型组TSP-1阳性表达弱;与模型组相比,各治疗组中TSP-1阳性表达增强,平均光密度升高,其中针药组平均光密度值升高最为明显(P<0.01)。ES定位于于卵巢颗粒细胞、卵泡膜细胞及卵泡液中。与空白组相比,模型组ES阳性表达升高;与模型组相比,各治疗组卵巢ES阳性细胞表达率及平均光密度值有不同程度的降低,其中针药组平均光密度值降低更为显著(P<0.01),西药组与模型组相比平均光密度值无统计学差异(P>0.05)。5.各组大鼠卵巢组织TSP-1、ES的表达量:同空白组相比,模型组卵巢TSP-1表达量减少,ES表达量增加,差异有统计学意义(P<0.01);同模型组相比,各治疗组卵巢TSP-1表达量增加,ES表达量降低,其中,针药组和中药组TSP-1表达量显著增加(P<0.01)、ES表达量显著降低(P<0.01),西药组TSP-1表达量升高幅度小于其余各治疗组,且西药组与针药组相比TSP-1表达量有差异(P<0.05),西药组与模型组相比ES表达量无统计学差异(P>0.05)。结论:1.来曲唑可成功诱导PCOS模型,且可作为可靠的、理想的动物模型用于研究;2.根据此病中医基本病机特点,选择补肾化坚方联合针刺治疗后,与模型组相比,大鼠体质量增量与卵巢相对质量降低,大鼠血清T、LH、AMH水平及LH/FSH比值降低,卵巢组织内未见囊状扩张卵泡,可见初级卵泡、优势卵泡以及黄体,由此可见针药结合对PCOS大鼠生殖内分泌、恢复排卵有良好的治疗作用;3.补肾化坚方联合针刺治疗后影响了卵巢组织中血管因子的表达,TSP-1表达量显著增加,ES表达量显著降低,由此可见针药结合对改善卵巢组织中血管因子的表达起到了调控作用;4.针刺可通过刺激卵巢局部、调控脏腑经络改善卵巢功能,补肾化坚方对机体起到整体调节改善作用,两者相辅相成,互相加强。推测补肾化坚方联合针刺治疗PCOS疾病的机制可能是通过调控卵巢内血管因子,进而改善卵巢内血流状态,起到调控生殖内分泌状态的作用。