角蛋白（keratin）是一种α-螺旋蛋白，目前已发现有30余种。不同分子量的角蛋白是上皮细胞在生长分化的不同时期由不同的基因表达产生，角蛋白被认为是上皮分化的不同阶段的分子标志。角质形成细胞（keratinocyte，KC），是表皮的主要细胞，其分化过程对表皮发挥正常功能是至关重要的。在KC分化此过程中，伴随着各种角蛋白的基因表达改变，其中存在于基底上层的角蛋白1（K1）和K10常被作为正常分化的标志，而K6与K16常被作为表皮过度增生和KC激活状态的标志。 抗角蛋白自身抗体（anti-keratin autoantibodies，AK auto Ab），广泛存在于正常人体内，包括可分别结合不同分子量角蛋白的抗体，具有IgG、IgA和IgM共3种类型。以往关于AK auto Ab的研究，已较为深刻地揭示了这种自身抗体的生物学性质与作用。间接免疫荧光（indirect immunofluorescence，IIF）和酶联免疫吸附测定（enzyme-linkedimmunosorbnent assny，ELISA）方法证明几乎所有正常人血清内均含有AK auto Ab。根据在表皮上的染色部位区别，Iwatsuki等把人血清样本分为五组，研究了AK auto Ab在表皮上的染色特点，并证实了AK autoAb主要作用于KC的张力纤维和桥粒。AK auto Ab与相应抗原的结合种属特异性差，但其组织特异性却非常严格，即使与表皮近似的移行 第四军医大学硕士论文 上皮也不能与 AK auto Ah发生反应。关于 AK auto Ah产生机制的研究 表明，未经任何免疫的小鼠的脾细胞即可自发产生AK auto Ah。其后， 众多学者从不同侧面对AK auto Ah的生物学作用进行了探索。Hintner 等通过研究发现 IgG AK auto Ah对不溶性的角蛋白中间丝（keratin intermediate ilament，KIF）凝集物具有调理吞噬的作用。还有研究表明， 当KC凋亡所产生的角蛋自小体进入真皮后，其周围就立即有大量的AK auto Ah结合、沉积。因此，现认为 AK auto Ah可通过结合机体衰老过 程中形成的自身变异成分而加速代谢产物的清除。还有研究表明，AK auto Ah与许多疾病状态有一定的联系。 在以往的研究中，我们成功地制备了不同血清AK auto Ah滴度的 动物模型，为在动物实验条件下研究AK aUtO Ah的作用提供了前提。 其后实验发现，自体皮片被包埋于皮下后 AK auto Ah迅速沉积于角蛋 白暴露的部位，而在羹肿形成后随着组织反应的消退，AK auto Ah逐 渐减少。我们认为AK auto Ah可能为发生的一系列最终封闭角蛋白的 反应提供了早期的生物信息，从而在机体的免疫应答和免疫状态的平 衡方面发挥着重要的作用。在一些病理情况下，如皮肤冻伤、烫伤、 接触性皮炎，AK auto Ah可以主动介入疾病的发展过程，一定程度上 起着控制病情发展、促进其向积极方向转归的作用。在银屑病的研究 中，我们发现患者血清AK auto Ah的阳性率明显低于正常人，而通过 对银屑病患者鳞屑洗脱可得到抗体，推测所得抗体可能就是 AK auto Ah。利用表皮或KIF凝集物吸附、消耗血清中的AK auto Ah，我们间 接地研究了 AK auto Ah对人 KC的作用，发现 AK auto Ah可以抑制 KC 的增生代谢，从而推断AKaut。Ah有利于限制表皮过度增生，维持皮 肤的正常生理状态，控制银屑病病情的进展和促进其康复。之后，我 们利用亲和层析法对AK auto Ah进行了纯化，直观地证实了正常人血 ．4－ 第四军医大学硕士论文 清内、银屑病患者血清内以及银屑病鳞屑洗脱液内均含有AK autoAb。 采用纯化的 AK auto Ah进行的一系列体外实验发现：AK auto Ah对于 KC的增殖和分化有抑制作用，并可诱导KC凋亡：AK ＂lit。Ah对恶性 KC也具有类似的作用；AK auto Ah可以抑制 ILJ 0对 KC的刺激作用。 另外，我们建立了分泌抗角蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株，获得了 具有较高生物活性的抗角蛋白单克隆抗体，并且进行了此单克隆抗体 轻、重链可变区基因的克隆及序列分析的研究工作。采用兔疫印迹方 法，我们证实了人血清IgG对角蛋白的反应性定位在Fab段，发现不 同个体对角蛋白的反应模式呈高度非均一性。 尽管以往的研究已较为深刻地揭示了这种自身抗体的生物学性质 与作用，但是无论是基于血清或是提纯AK auto Ah的研究都无法摆脱 多克隆抗体研究的限制。多克隆的AK auto Ah含有针对不同分子量角 蛋白的抗角蛋白抗体，或者很有可能含有针对相同分子量角蛋白的不 同抗