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目的目前,全球约有3.5亿慢性HBV携带者,我国乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)阳性率为约9.75%,现该症患者约2000多万。每年死于乙型肝炎相关疾病者约27万多人(23/10万)。因此,建立一种简便、灵敏、重复性好的HBV检测方法具有十分重要的意义。目前临床上使用的检测乙肝病毒复制的实验室指标各有各的临床意义,但是,他们或缺乏特异性,或较难在基层医院中普及、推广。目前广泛使用的抗乙肝病毒药物虽有一定的治疗效果,但尚无有效合理的评价治疗效果的指标,无法确定停药的时间,停药后是否会复发(反弹)亦缺乏有效的预示指标。因此,临床迫切需要能够有效评估预示病毒复制以及从血清HBeAg阴性的乙肝病毒感染者中发现处于活动期的肝炎患者的实验室检测指标。随着分子生物学、免疫学和计算机等技术的迅速发展,新的实验室检测指标—乙型肝炎病毒外膜大蛋白(Hepatitis B Virus Large Surface Protein,LHBs),已经逐渐应用于实验室诊断中。但是目前尚无成熟的乙型肝炎病毒外膜大蛋白实验室检测应用于临床,本实验通过大量的临床样本验证了乙型肝炎病毒外膜大蛋白在检测各类乙肝患者病毒复制方面的特异性,旨在为我国日趋严峻的乙型肝炎防治工作的改善奠定理论和实验基础。方法1、临床标本采集:用无菌静脉采血针采集患者的静脉血;2、首先通过检测乙肝五项确定乙型肝炎患者;3、通过PCR检测上述患者血清中的病毒复制量;4、通过ELLISA检测上述患者血清中乙肝病毒大蛋白(乙肝病毒大蛋白前S抗原或者乙肝病毒Dane颗粒抗原)的阴阳性;5、通过大量临床样本检测结果评估乙肝病毒大蛋白(乙肝病毒大蛋白前S抗原或者乙肝病毒Dane颗粒抗原)阴阳性与乙肝病毒PCR结果的一致性。结果1、LHBs的蛋白水平与HBV DNA拷贝数对数值之间有良好的相关性,相关系数r=0.932。方差分析显示不同HBV DNA拷贝数组别之间,LHBs含量呈显著性差异;2、乙型肝炎大三阳患者中LHBs的阳性率与HBV DNA的阳性率经X~2检验没有显著性差异(P＞0.05);3、乙型肝炎小三阳患者中HBV DNA的阳性检出率为51.12%(181/354);LHBs的阳性检出率为55.65%(197/354),二者差异无统计学意义(X~2=0.81,P＞0.05);4、本实验分别用HBV DNA和LHBs两个实验室诊断指标对593份乙型肝炎患者(HBsAg阳性)血清进行测定,查X~2界值表得P＜0.005。按a=0.05水准,可以认为两种方法的检测结果相同。综上所述,大蛋白的检出结果与HBV DNA的检出结果无明显差异。HBV DNA拷贝数的对数值与LHBs表达具有相关性(r=0.932,P＜0.001),HBV DNA拷贝数的对数值变化可以用LHBs OD值为变量的线性回归模型来解释结论1、LHBs能够反应HBV的复制情况,血清中LHBs的含量与HBV DNA的拷贝数具有较好的相关性;2、LHBs是反映HBeAg阴性乙肝患者病毒复制情况的新的血清免疫学指标,为临床乙型肝炎患者病毒复制检测新指标的开发提供了实验依据;3、为乙肝抗病毒治疗终点寻找到了一个可行的实验室检测指标。