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哺乳动物受精是精子和卵子相互结合、融合形成合子的过程。它既是胚胎发育的开始，也是一个新生命的起点。但是，人们对受精的分子机制却知之甚少。综合该方向的研究成果和本实验室的研究结果，我们猜测在精卵融合过程中，富含半胱氨酸的CRISP1可能与二硫异构酶PDIA3之间存在相互作用。因此本实验解析这两种蛋白之间的相互作用以及CRISP1在睾丸和顶体反应前后精子中的定位。 本实验选用pET-32a作为原核表达载体，构建了原核表达载体pET-CRISP1。将pET-CRISP1转化进大肠杆菌中利用IPTG进行诱导表达，成功得到了融合蛋白HIS-CRISP1。利用切胶纯化的方法分离纯化融合蛋白HIS-CRISP1，经纯化的HIS-CRISP免疫昆明(KM)小鼠，成功制备了小鼠抗绒山羊CRISP1腹水多克隆抗体。用自制小鼠抗绒山羊CRISP1腹水多克隆抗体分别处理绒山羊睾丸组织切片和精子涂片，免疫组织化学和免疫细胞化学检测结果显示，CRISP1广泛存在于绒山羊睾丸组织中;在未发生顶体反应的绒山羊精子中，CRISP1主要存在于精子尾部;在发生了顶体反应的绒山羊精子中，CRISP1主要存在于精子的赤道区。 本实验构建了酵母表达载体pGAD-CRISP1、pGAD-CRISP1(A)、pGAD-CRISP1(B)和pGBK-PDIA3，本实验室保存有酵母表达载体pGBK-PDIA3(A)和pGBK-PDIA3(B)，将上述酵母表达载体两两组合进行酵母双杂交实验，结果显示，绒山羊CRISP1与PDIA3之间存在相互作用，且PDIA3(A)段与CRISP1发生了相互作用。同时，本实验构建了带有HIS标签的pcDNA-CRISP1和带有HA标签的pcDNA-PDIA3真核表达载体，将两种真核表达载体共转染至293T细胞中，利用免疫共沉淀技术western blotting结果显示，绒山羊CRISP1与PDIA3之间存在相互作用。 此外，本实验还筛选出了绒山羊CRISP1单克隆稳定细胞系，以便稳定表达绒山羊CRISP1蛋白。