利用人内皮抑素基因构建植物表达载体及对烟草的遗传转化

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人内皮抑素(Endostatin)是第一个进入临床研究的内源性血管生成抑制剂,是胶原蛋白ⅩⅧC末端非胶原区NC1结构域的20KD的片段。它可以抑制内皮细胞的增殖和转移,从而降低肿瘤内血管生成,阻断营养通路,达到杀死肿瘤细胞的目的。其最大的优点是无毒性和无抗药性。植物生物反应器生产药物蛋白成本低,生产等量目的蛋白只需要花其它表达系统所需费用的10%,而且一旦建立起稳定而高效的表达系统,只需扩大种植面积就可大量生产目的蛋白。本研究将人内皮抑素基因重组于植物双元表达载体pGA643,得到重组质粒pGE;用三亲融合法将其导入农杆菌LBA4404中,采用叶盘法转化烟草,经诱导与筛选,获得了卡那霉素抗性植株;提取抗性植株总DNA,通过PCR、斑点杂交和Southern杂交检测,筛选出了整合有外源基因的转化植株,为进一步研究人内皮抑素在烟草中的表达及生物学功能奠定了基础。
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