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目的探讨采用两种不同冷冻方法冻融人大块卵巢组织(约15mm2×2-3mm)的冷冻效果以及比较冷冻复苏人卵巢组织与新鲜卵巢组织体外培养后对卵泡活性的影响。方法卵巢组织取自15例病人,均来自在2011年6月至2012年6月期间,山东省齐鲁医院妇产科非卵巢肿瘤患者需切除卵巢的手术。用灭菌剪刀将卵巢组织与周围结缔组织分离,被剪下的1/2-1/3大小卵巢组织放入盛有10ml PBS的无菌离心管巾置于冰上,10min内送至实验室无菌层流操作台中操作。用眼科剪及解剖刀在培养皿巾将卵巢组织的髓质分离。在实体显微镜下将卵巢皮质切成2-3mm厚,面积1.5cm2大小的组织块3块,分别为新鲜对照组(A组)、玻璃化冷冻组(B组)和两步法冷冻组(C组),即同一病人的卵巢组织按上述方法分为3块并随机分配到三组中。A组组织取2/3为体外培养用,其余组织用4%多聚甲醛固定做组织学分析。B、C冷冻组冷冻复苏后,比较分析三组卵泡形态学变化,计数正常形态卵泡比率。并进行卵巢组织体外培养后与A组体外培养的卵巢组织比较,测定三组培养液上清中雌激素、孕激素浓度,免疫组化染色测定培养后的卵巢组织增殖细胞核抗原(Ki67)及B细胞淋巴瘤/白血病-2基因(Bcl-2)表达水平以及采用原位末端标记技术(TUNEL)的方法共同评估卵泡增殖及凋亡活性。结果1. A组正常形态卵泡比率(91.9%)显著高于B组(71.3%)和C组(82.9%),差异有统计学意义(P<0.05),C组高于B组,差异有统计学意义(P<0.05)。C组的始基卵泡和初级卵泡的正常形态率分别为86.8%、54.4%,均分别高于B组73.8%、44.4%,差异有统计学意义(P<0.05)。2.卵巢组织体外培养后同一时期新鲜组、玻璃化冷冻组、两步法冷冻组的激素分泌测定结果无显著性统计学差异(P>0.05)。3. C组Ki67的阳性率为73%,分别显著高于A组50%和B组55%(P<0.05),A组低于于B组(P<0.05)。Bcl-2阳性率,A组为57%和C组61%之间无统计学差异(P>0.05),但B组42%阳性率分别低于A组和C组(P<0.05)。4.原位末端标记技术(TUNEL)检测发现：各组巾始基卵泡、初级卵泡、次级卵泡巾都没有阳性染色,但在各组中都有组织基质巾的细胞染色呈阳性。计算凋亡细胞的比率：冷冻复苏后体外培养的卵巢组织的凋亡细胞阳性率高于新鲜组卵巢组织(0.02%)：玻璃化冷冻组(0.12%)与两步法冷冻组(0.05%),然而新鲜卵巢组织与两步法冷冻组之间无统计学差异(P=0.058)。玻璃化冷冻组的凋亡细胞的比率分别高于两步法冷冻组与新鲜卵巢组织组,即B组与A组及C组分别比较,差别均有统计学意义(P<0.05)。结论1.人大块卵巢组织冷冻复苏后组织内卵泡形态结构良好,体外培养后卵泡增殖及抗凋亡活性明显,说明人大块卵巢组织能耐受冻融过程及冷冻保存人大块卵巢组织具有可行性。2.玻璃化法与两步法冷冻大块人卵巢组织对卵巢组织分泌激素无明显影响。3.两步法冷冻保存人大块卵巢组织优于玻璃化冷冻法。