人源拓扑异构酶IIβ（h TOP2β）是一种普遍存在人类细胞中的酶,它通过催化DNA的断裂和重连来改变DNA的拓扑结构。在肿瘤细胞的快速繁殖中由于DNA的快速复制刺激相应的h TOP2β含量显著增加,因此h TOP2β在正常细胞与肿瘤细胞中存在明显差异,所以h TOP2β是许多抗肿瘤药物的重要靶标蛋白。依托泊苷（VP-16）是靶向h TOP2β的重要代表之一,主要是在h TOP2β剪切DNA之后,通过和h TOP2β-DNA形成稳定的不可逆转的三元复合物,引起DNA积累并诱导细胞死亡。前期课题组以4’-去甲基表鬼臼毒素（DMEP）为母核对其结构的C环4位以C-S连接了一系列的含有氮原子的杂环,通过对不同的肿瘤细胞进行了系统的生理生化实验后筛选出一系列抗肿瘤活性好、对正常细胞毒性低的新型DMEP衍生物（DMEPs）。以VP-16作为阳性参照,这些DMEPs对肺癌、肝癌和宫颈癌等一系列肿瘤细胞的杀伤力有显著提高,同时对人正常肝细胞HL-7702的毒性降低20倍以上。但是尚不明确这类小分子对h TOP2β的作用机理。基于此,本课题选取了两个五元环、两个六元环和四个稠环为取代八个活性较强的化合物作为研究对象,通过解析DMEPs与h TOP2β的复合物晶体结构来解释这八个DMEPs作用于h TOP2β的机理机制。我们通过表达宿主——BL21（DE3）p Lys S诱导表达以及Ni、Heparin柱和SD-200柱纯化获取目标蛋白h TOP2βcore。将单链DNA通过退火的方式获得用于蛋白质结晶的双链DNA,然后培养化合物与h TOP2β-DNA的三元复合物晶体。通过对结晶条件筛选和孵育方式优化,如:试剂盒初筛、沉淀剂比例、缓冲液浓度和p H、共孵育和分开孵育的优化,并采用悬滴法进行结晶,最终在2-甲基-2,4-戊二醇（MPD）含量为20%,吗啉乙磺酸（MES）浓度为50 m M,p H=5.7,氯化镁浓度为100 m M的条件下获得分辨率达到3.0?的复合物晶体。利用HKL2000处理衍射数据、Phenix进行分子置换（MR）和Py Mol结构建模,获得了晶体的结构模型,但是在结构中并未找到DMEPs分子。综上所述,我们通过一系列的晶体培养条件的优化和分子置换获得h TOP2β-DNA-DMEPs结构模型,但在获取的结构模型中尚未找到DMEPs的结构。h TOP2β-DNA-VP-16的结构显示出,断裂口处足以容纳我们的目标分子,所以我们还需要继续进行结晶条件的优化,找到能够使得DMEPs进入的结晶条件,从而为新的DMEPs设计提供理论指导。