【摘 要】
:
人源拓扑异构酶IIβ(h TOP2β)是一种普遍存在人类细胞中的酶,它通过催化DNA的断裂和重连来改变DNA的拓扑结构。在肿瘤细胞的快速繁殖中由于DNA的快速复制刺激相应的h TOP2β含量显著增加,因此h TOP2β在正常细胞与肿瘤细胞中存在明显差异,所以h TOP2β是许多抗肿瘤药物的重要靶标蛋白。依托泊苷(VP-16)是靶向h TOP2β的重要代表之一,主要是在h TOP2β剪切DNA之后,
论文部分内容阅读
人源拓扑异构酶IIβ(h TOP2β)是一种普遍存在人类细胞中的酶,它通过催化DNA的断裂和重连来改变DNA的拓扑结构。在肿瘤细胞的快速繁殖中由于DNA的快速复制刺激相应的h TOP2β含量显著增加,因此h TOP2β在正常细胞与肿瘤细胞中存在明显差异,所以h TOP2β是许多抗肿瘤药物的重要靶标蛋白。依托泊苷(VP-16)是靶向h TOP2β的重要代表之一,主要是在h TOP2β剪切DNA之后,通过和h TOP2β-DNA形成稳定的不可逆转的三元复合物,引起DNA积累并诱导细胞死亡。前期课题组以4’-去甲基表鬼臼毒素(DMEP)为母核对其结构的C环4位以C-S连接了一系列的含有氮原子的杂环,通过对不同的肿瘤细胞进行了系统的生理生化实验后筛选出一系列抗肿瘤活性好、对正常细胞毒性低的新型DMEP衍生物(DMEPs)。以VP-16作为阳性参照,这些DMEPs对肺癌、肝癌和宫颈癌等一系列肿瘤细胞的杀伤力有显著提高,同时对人正常肝细胞HL-7702的毒性降低20倍以上。但是尚不明确这类小分子对h TOP2β的作用机理。基于此,本课题选取了两个五元环、两个六元环和四个稠环为取代八个活性较强的化合物作为研究对象,通过解析DMEPs与h TOP2β的复合物晶体结构来解释这八个DMEPs作用于h TOP2β的机理机制。我们通过表达宿主——BL21(DE3)p Lys S诱导表达以及Ni、Heparin柱和SD-200柱纯化获取目标蛋白h TOP2βcore。将单链DNA通过退火的方式获得用于蛋白质结晶的双链DNA,然后培养化合物与h TOP2β-DNA的三元复合物晶体。通过对结晶条件筛选和孵育方式优化,如:试剂盒初筛、沉淀剂比例、缓冲液浓度和p H、共孵育和分开孵育的优化,并采用悬滴法进行结晶,最终在2-甲基-2,4-戊二醇(MPD)含量为20%,吗啉乙磺酸(MES)浓度为50 m M,p H=5.7,氯化镁浓度为100 m M的条件下获得分辨率达到3.0?的复合物晶体。利用HKL2000处理衍射数据、Phenix进行分子置换(MR)和Py Mol结构建模,获得了晶体的结构模型,但是在结构中并未找到DMEPs分子。综上所述,我们通过一系列的晶体培养条件的优化和分子置换获得h TOP2β-DNA-DMEPs结构模型,但在获取的结构模型中尚未找到DMEPs的结构。h TOP2β-DNA-VP-16的结构显示出,断裂口处足以容纳我们的目标分子,所以我们还需要继续进行结晶条件的优化,找到能够使得DMEPs进入的结晶条件,从而为新的DMEPs设计提供理论指导。
其他文献
大米是人们日常食用的主食之一,稻米的种植与生产在世界范围内都有着重要的地位。但近年来随着世界人口的增长,仍需要进一步提高水稻(Oryza sativa L.)产量。在水稻育种上,株高、穗型、籽粒大小和叶片等因素均与水稻产量密切相关。株高影响抗倒伏性,穗型和籽粒大小直接决定了水稻产量高低,叶片通过光合作用促进淀粉等糖类物质的合成影响产量。因此对水稻株高、穗型、籽粒大小和叶片等性状的基因克隆和性状改良
新疆甜水海地区石炭纪地层出露较为广泛,其沉积时代的准确限定对研究该地区及西昆仑造山带的地质构造演化具有重要意义。本文通过详细的野外地质调查和剖面测制,在原划归寒武系的甜水湖组中发现大量Protohaploxypinus、Hamiapollenites和Striatolebachiites等可见双囊具肋花粉,与前人建立的新疆晚石炭世晚期的孢粉组合较为相似;在原划归长城系的甜水海岩群中发现牙形刺分子,
新疆西昆仑铁克里克东一带长城系赛图拉岩群b岩组变质岩主要沿昆仑山呈近东西向展布,为一套区域动力热流变质作用形成的变质岩。本次工作采集了6件较有代表性的变质岩样品做硅酸盐、稀土、微量元素分析测试。原岩恢复相关判别图解显示其原岩是以粘土、杂砂岩的碎屑岩为主,还有一些火山岩,具有一定的复杂性;构造环境判别相关图解显示其为岛弧环境和活动大陆边缘环境,碎屑物源复杂;赛图拉岩群原岩恢复及构造环境的重建,丰富了
泉水沟北东侧花岗闪长岩体分布于泉水沟-冰水河断裂以北,是西昆仑三十里营房-大红柳滩-泉水沟构造-岩浆岩带的重要组成部分。LA-ICP-MS锆石U-Pb年代学研究结果显示岩体侵位时间为224.31±0.99Ma,形成时代为晚三叠世。地球化学分析显示岩石具有富硅、富碱、富钾,贫锰、钛的特点,铝饱和指数A/CNK=1.03-1.07,总体为过铝质高钾钙碱性S型花岗岩;岩石富集轻稀土元素,具铕负异常、铈轻
在团结峰地区化石山新发现玄武岩。通过常量元素分析,该区域玄武岩TAS图落入碱性区,AR-SiO2图解落入碱性区,说明玄武岩为碱性玄武岩。根据主量元素分析,该碱性玄武岩为板内玄武岩,兼具洋中脊玄武岩的特征。根据微量和稀土元素分析,其可能为由两种或两种以上不同属性的地幔源经混合后再发生局部熔融的产物,该区玄武岩显示出板内玄武岩向洋中脊玄武岩演化的特征。根据其构造环境分析,显示团结峰地区碱性玄武岩可能形
随着课程改革的推进,探究式学习逐渐走入教师的视野。探究式学习旨在激发学生主动探究的兴趣,在学习知识的同时培养创新与实践能力。随着对探究式学习的实践应用研究不断涌现,在一些实践案例中也暴露出一些问题,存在诸多不合理之处。本文从探究式学习的特质中发掘其优势与不足,反思在应用中存在的问题,并提出建议。
随着劳动教育的全面推进,在学校操作层面,出现了难以实现常态化开展、长效化实施等现实难题,如教育资源如何统筹、课程体系如何建设、师资队伍如何培养、劳动教育评价如何展开等问题。形成劳动教育实施的有效机制,成为推动劳动教育可持续发展的重要条件,要构建管理机制、完善实施机制、强化保障机制。
天然油脂体(oil bodies,OBs)是存在于植物种子中的天然油滴,因其天然乳化、富含营养成分、加工操作相对简单及环境友好等优势,在食品领域有着巨大的应用潜力。然而,天然油脂体在加工过程中存在的物理化学不稳定性影响油脂体的应用,因此提高油脂体乳液的物理化学稳定性十分必要。本研究以4种油脂体(大豆、花生、芝麻和菜籽)为研究对象,考察了不同种类油脂体乳液在不同条件下的稳定性,利用原子力显微镜考察了
分蘖洋葱(Allium cepa L.var.multiplcans Bailey syn.var.Agrogatum Don)与黄瓜(Cucumis sativus L.)套作可降低黄瓜病害提高产量,这与分蘖洋葱释放的化感物质有关,但基因调控化感物质的产生尚有待研究。前期发现分蘖洋葱化感物质产生的主要途径可能为有机硫化物合成代谢途径,而蒜氨酸酶(Alliinase,ALL)为该代谢途径的关键酶。
<正>ANCA相关性小血管炎(ANCA—associated vasculitis, AAV)是一组以小血管炎症为特征的自身免疫性疾病,肾脏最易受累,累及率约80%[1],称为ANCA相关性血管炎肾损害,临床上多为急进性肾小球肾炎的表现,其病理特征为节段坏死性肾小球肾炎及新月体肾炎。IgA肾病是原发性肾小球疾病中发病率最高的一种,是以IgA为主的免疫球蛋白或IgA及肾小球系膜区沉积的补体成分为主要