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目的：介绍一种快速高效的小鼠心肌梗死模型详细制作方法,并直接将这种方法与经典法(开胸法)对比。用这种新方法建立小鼠心肌梗死模型,了解小鼠心肌梗死后外周血TNF-α、Th1/Th2、Treg/Th17的比值变化,以及依拉普利是否对其有调节作用。方法：将176只雄性C57BL/6小鼠随机分为4组,即新方法心肌梗死组(N-M组)86只,经典法心肌梗死组(C-MI组)50只,新方法假手术组(N-Sham组)20只,经典法假手术组(C-Sham)20只。新方法造心肌梗死模型是在麻醉状态下气管插管,左胸前开一个小的切口,人为使心脏通过这个切口挤出体外,手术结扎冠状动脉左前降支从而建立小鼠心肌梗死模型。假手术组操作同前,不结扎冠状动脉。经典法造心肌梗死模型是在麻醉状态下气管插管,剪短左胸前肌肉和肋骨,开胸后结扎冠状动脉。假手术组者操作同上,不结扎冠状动脉。术后观测各组小鼠血清TNF-α浓度,检测小鼠心肌梗死后28天心脏彩超,以判断两种模型方法对局部组织造成损伤有无不同以及两种手术方法梗死效果是否一致。再将新方法造模手术后成活小鼠随机分为两组,即依拉普利干预组(N-Ena组)每日给予依那普利7.5mg/kg灌胃和心肌梗死模型组(N-MI组)不给于干预。分别于术后第3天、第7天、第14天、第28天处死N-Ena组和N-MI组各8只、N-Sham组5只,心脏采血,分别采用流式细胞学、酶联免疫吸附试验(Enzymelinked immunosorbent assay, ELISA)检测心肌梗死后不同时间点外周血TNF-α浓度、Th1/Th2、Treg/Th17的比值。术后28天给各组小鼠行心脏彩超检查评估各组小鼠心脏功能。以观察依拉普利是否有调节外周血TNF-α浓度、Th1/Th2、 Treg/Th17的比值的作用。统计学分析：数据统计由SPSS13.0软件包完成,所有的计量资料数据采用均数±标准差(X±S)表示,各组均数比较采用单因素方差分析或t检验。方差齐时,组件样本均数比较行单因素方差分析(ANOVA),两两比较采用最小显著差法(least significant difference, LSD),方差不齐时,组件比较硬Welch检验,两两比较用Dunnett’s T3方法,以P小于0.05为差异有统计学意义。结果：1、新方法造小鼠心肌梗死模型结扎冠状动脉的过程所需时间是3.0±0.5minutes,连接呼吸机通气时间5.0±0.8minutes,而经典法冠脉结扎需要16±1.5minutes完成,甚至更长时间,连接呼吸机时间31±2.5minutes。新方法造心肌梗死模型死亡率为16.3%,经典法造心肌梗死模型死亡率为24%。比较两种不同手术方法术后急性期2个时间组血清TNF-α浓度,第3天时心肌梗死模型组(N-MI组、C-MI组)和假手术组(N-Sham组、C-Sham组)血清TNF-α浓度数值分别为33.99±2.75pg/mL、66.25±3.30pg/mL、14.98±1.13pg/mL、24.03±1.40pg/mL。数值满足方差齐性(P=0.211),单因素方差分析结果显示：各模型组第3天时血清TNF-α浓度有差异(F=521.23, P<0.001),两两比较结果：N-MI组和C-MI组血清TNF-α浓度高于N-Sham组和C-Sham组,差异具有统计学意义(P<0.001); C-MI组血清TNF-α浓度高于N-MI组(P<0.001); C-Sham组血清TNF-α浓度高于N-Sham组(P<0.001)。第7天时N-MI组、C-MI组、N-Sham组、C-Sham组血清TNF-α浓度数值分别为41.35±2.66pg/mL、84.56±2.49pg/mL、8.27±0.88pg/mL、8.32±0.79pg/mL。数值满足方差齐性(P=0.424),单因素方差分析结果显示：各模型组第7天时血清TNF-α浓度有差异(F=1917.25,P<0.001),两两比较结果显示：N-MI组和C-MI组血清TNF-α浓度高于N-Sham组和C-Sham组(P(0.001)；C-MI组血清TNF-α浓度高于N-MI组(P<0.001); C-Sham组血清TNF-α浓度与N-Sham组无统计学差异(P=0.971)。分别比较各模型组(N-MI组、C-MI组、N-Sham组、C-Sham组)在第3天、第7天、第14天、第28天时血清TNF-α浓度随时间变化。各模型组血清TNF-α浓度在不同时间组满足方差齐性(P值分别为P=0.426, P=O.641,P=0.537,P=0.084)。单因素方差分析结果显示：各组血清TNF-α浓度差异有统计学意义(P<0.001),两两比较结果是：N-MI、C-MI组不同时间点血清TNF-α浓度不同(P<0.001),梗死后血清TNF-α浓度第3天即升高,第2周开始下降。N-Sham组、C-Sham组第7天时TNF-α浓度即明显低于第三天(P<O.001),之后持续维持在这个水平。第28天时检查各模型组心脏彩超,测量其心率(HR)、左室舒张末期内径(LVEDd)、左室收缩末期内径(LVESd)、左室射血分数(LVEF)和左室短轴缩短分数(LVFS), N-MI组、C-MI组、N-Sham组、C-Sham组LVEDd、LVESd、LVFS、LVEF均满足方差齐性(P值分别为P=0.297、P=0.254、P=0.682、P=0.382)。对比发现新方法与经典法造小鼠心肌梗死模型4周后N-MI组、C-MI组LVEDd、LVESd、 LVFS、LVEF值对比无统计学差异(P值分别为P=0.613、P=0.698、P=0.665、P=0.232)；新方法与经典法造小鼠假手术组模型,4周后N-Sham组和C-Sham组心功能无统计学差异(P值分别为P=0.523、P=0.723、P=0.751、P=0.605);而两种方法所造心肌梗死模型与假手术组模型对比,心梗LVEF明显低于假手术组(P<0.001), LVEDd、LVESd明显高于假手术组(P<0.001)。2.分别分析第3天、第7天、第14天、第28天时各组(N-MI组、N-Ena组、N-Sham组)血清TNF-α浓度有无差异。第3天时,N-MI组、N-Ena组、N-Sham组血清TNF-α浓度不满足方差齐性(P=0.034),组间比较用Welch检验,结果P<0.001,各模型组间有显著差异,两两比较用Dunnett’s T3法,N-Ena组均值略低于N-MI组,但差异无统计学意义(P=0.175), N-Ena组血清TNF-α浓度与N-MI组无明显差异。第7天、第14天、第28天时各模型组血清TNF-α浓度满足均方差齐性(P值分别为P=0.392,P=0.068,P=0.111),单因素方差分析结果显示：各模型组第7天、第14天、第28天时血清TNF-α浓度有统计学差异(F值分别为F=409.71,F=159.18,F=82.61,P值均<0.001)。两两比较结果：第7天时,N-Ena组血清TNF-α浓度低于N-MI组,有统计学差异(P<0.001)；N-Ena组和N-MI组血清TNF-α浓度均高于N-Sham组,有统计学差异(P<0.001)。第14天和第28天时N-Ena组血清TNF-α浓度低于N-MI组,有统计学差异(P<0.001); N-Ena组和N-MI组血清TNF-α浓度均高于N-Sham组,有统计学差异(P<0.001)。流式细胞学检查结果：分析第28天时N-sham组与N-MI组和N-Ena组Treg/Th17。N-MI组、N-sham和N-Ena组Treg、Th17细胞比率均满足均方差齐性(P值分别为P=0.085、P=0.406)。单因素方差分析结果显示,N-MI组、N-sham和N-Ena组Treg、Th17的含量和Treg/Th17值有显著统计学差异(F值分别为F=583.47,F=478.80,P值均<0.001),两两比较有显著统计学差异(P<0.001), N-MI组和N-Ena组Treg细胞比率均低于假手术组,N-Ena组Treg细胞比率高于心肌梗死组(N-MI组),N-MI组和N-Ena组Th17细胞比率均高于假手术组,其中N-Ena组Th17细胞比率显著低于N-MI组(P<0.001)。三组Treg/Th17值不满足方差齐性(P=0.002),比较用Welch检验结果(P<0.001),N-MI组和N-Ena组Treg/Th17均比N-Sham组显著降低,差距有统计学意义(P<0.001)。两两比较用Dunnett’s T3法,其中N-Ena组与N-MI组相比Treg/Th17增加,差距有统计学意义(P<0.001), N-Ena组和N-MI组与N-Sham组相比Treg/Th17降低,差距有统计学意义(P<0.001)。分析第28天N-sham组与N-MI组、N-Ena组Th1/Th20各模型组Th1、Th2均满足方差齐性(P值分别为P=0.956、P=0.076)。单因素方差分析结果是各组Th1、Th2细胞比率不同,差异有统计学意义(F值分别为F=531.03, F=925.6,P<0.001)。两两比较示：N-Ena组和N-MI组Th1细胞比率均高于N-Sham组,(P<0.001), N-Ena组Thl细胞比率低于N-MI组,差异有统计学意义P<0.001。N-Ena组和N-MI组Th2细胞比率均低于N-Sham组(P<0.001)。N-Ena组Th2细胞比率高于N-MI组,差异有统计学意义(P<0.001)；各组Th1/Th2比值不满足方差齐性(P=0.007),比较用Welch检验,结果P<0.001,说明不同组间存在差异,两两比较用Dunnett’s T3法,N-Ena组和N-MI组Thl/Th2比值均高于N-Sham组(P<0.001),N-Ena组Th1/Th2比值低于N-MI组,差异有统计学意义(P<O.001)。术后第28天,给各组小鼠行心脏彩超检查,测其心率(HR)、左室舒张末期内径(LVEDd).左室收缩末期内径(LVESd)、左室射血分数(LVEF)和左室短轴缩短分数(LVFS)。N-MI组、N-Ena组、N-Sham组LVEDd、LVESd、LVFS、LVEF均满足方差齐性(P值分别为P=0.103、P=0.O69、P=0.646、P=0.724)。单因素方差分析结果：各组LVEDd、LVESd、LVFS、LVEF差异有统计学意义(P<0.001), N-Ena组和N-MI组LVEDd、LVESd均高于N-Sham组(P<0.001), LVFS、LVEF均显著低于N-Sham组,其中N-Ena组LVEDd、LVESd均低于N-MI组,LVFS、LVEF均显著高于N-Sham组,差异有统计学差异(P<0.001),说明药物改善心肌梗死后心脏射血功能有意义。结论：1、新方法建立心肌梗死模型与经典法相比更加快速、高效,其中一个突出优点是组织损伤小,保持了胸肌的完整性,利于术后恢复。2、新方法建立心肌梗死模型与经典法对比心肌的损伤效果相当,这一点可以通过术后28天超声心动图说明.3、小鼠心肌梗死后给予依那普利干预,可降低心梗后血清TNF-α浓度,梗死后第7天起,依那普利干预组血清TNF-α浓度与梗死组(N-MI组)相比降低。4、小鼠心肌梗死后28天Thl/Th2、Treg/Th17平衡发生破坏,Th1/Th2比值升高、Treg/Th17比值降低。5、小鼠心肌梗死后给予依那普利干预,可以调节小鼠因心肌梗死而造成的Thl/Th2、Treg/Th17比值失衡,这可能与依那普利抑制心室重构作用有关。