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间充质干细胞(mesenchymal stem cells，MSCs)是一类具有多向分化潜能、低免疫源性、来源广泛的成体干细胞。近年来随着对MSC的研究逐渐深入，发现MSC还具有影响恶性肿瘤发生、发展及转移的功能。目前研究较多的是入骨髓来源间充质干细胞( human bone marrow mesenchymal stem cells，HBM-MSC)，而人脐带血来源间充质干细胞(human umbilical cord blood mesenchymal stem cells，HUCB-MSC)因较HBM-MSC更为原始，更具有取材方便、易于体外培养和低风险感染等优势，因此本实验选用HUCB-MSC进行研究。
目的：本研究采用MTT、倒置相差显微镜和流式细胞术方法观察HUCB-MSC对人胃癌MGC80-3细胞体外生长的数量变化；采用流式细胞仪半定量法和逆转录-聚合酶链反应观察胃癌转移信号传导通路中相关产物MMP-7、TIMP-1的表达变化，确定HUCB-MSC对胃癌MGC80-3细胞侵袭及转移能力的影响，为胃癌提供新的治疗途径及其靶向治疗提供理论依据。
方法：培养HUCB-MSC，通过流式细胞仪进行细胞表型鉴定；提取人脐带血间充质干细胞条件培养基(MSC-CM)并作用于人胃癌MGC80-3细胞，采用MTT法测定不同浓度(25％、50％、75％、100％)MSC-CM作用于胃癌MGC80-3细胞后，胃癌细胞24h、48h、72h抑制率；流式细胞技术(flow cytometry,FCM)测定胃癌MGC80-3细胞凋亡率；倒置相差显微镜观察胃癌MGC80-3细胞形态的变化；分别采FCM和逆转录-聚合酶链反应(revers transcription PCR，RT-PCR)观察肿瘤转移信号传导通路中相关产物基质金属蛋白酶(MMP-7)、基质金属蛋白酶抑制剂（TIMP-1）的水平变化，运用SPSS13.0统计学软件进行数据处理，各组数据均以x±s的形式表示。多组的组间均数比较采用方差分析(one-wayANOVA)。
结果：
1 HUCB-MSC的表型鉴定
采用流式细胞仪表型分析获得的第四代HUCB-MSC均质性好，细胞表达情况为：高表达PE-CD73(97.69％)、PE-CD90(100％)、PE-CD105(96.57％)；低表达FITC-CD19(0.50％)、FITC-CD34(0.23％)、PE-CD11b(0.20％)、PE-CD45(0.11％)；对组织相容性表型分析显示低表达HLA-DR(0.07％);PE-IgG(1.06％)、FITC-IgG(0.17％)。
2 MTT检测结果显示：MGC80-3细胞和浓度分别为25％、50％、75％、100％MSC-CM共培养后，与空白对照组（不含MSC-CM）相比，MSC-CM在25％-100％浓度范围内对MGC80-3细胞生长的抑制作用较为显著。不同浓度MSC-CM处理MGC80-3细胞24h、48h、72h后，各实验组抑制率均有不同程度增高，实验组与空白对照组相比比较及各实验组之间比较，均有统计学意义（P＜0.05）。MGC80-3细胞和浓度分别为25％、50％、75％、100％MSC-CM共培养72h后，抑制率分别为(28.296±7.761)％、(35.800±8.543)％、(57.964±10.541)％、（67.695±14.444）％。抑制率以100％MSC-CM作用72h最高，达到（67.695±14.444）％。
3 流式细胞术分析结果显示：MSC-CM能使MGC80-3细胞发生凋亡。MGC80-3细胞与浓度依次为0、25％、50％、75％MSC-CM共培养72h后，可测得典型的亚二倍体凋亡峰。细胞凋亡百分率分别为(3.570±0.901)％、（9.780±2.643）％、（14.150±3.710）％、(18.500±4.471)％，且随MSC-CM浓度的增大而逐渐增高。各实验组与空白对照组比较及各实验组之间比较均有统计学意义(P＜0.05)。
4 倒置相差显微镜观察显示：在×100倍下观察空白对照组MGC80-3细胞生长良好，贴壁紧密，细胞呈片状融合，呈梭形，形态饱满；而75％MSC-CM作用72h后的MGC80-3细胞出现贴壁不良，细胞密度降低，细胞固缩为圆形或卵圆形。
5 流式细胞仪半定量检测：MMP-7和TIMP-1蛋白水平结果显示：MGC80-3细胞与浓度依次为0、25％、50％、75％MSC-CM共培养72h后，各实验组中MMP-7表达的蛋白荧光指数(FI)均低于空白对照组，且随着MSC-CM浓度增加而逐渐降低；各实验组中TIMP-1表达的蛋白荧光指数(FI)均高于空白对照组，且随着MSC-CM浓度增加而逐渐增高。分别比较二者实验组和空白对照组的FI值，均有统计学意义(P＜0.05)。
6 逆转录-聚合酶链反应半定量测定MMP-7和TIMP-1表达结果显示：MGC80-3细胞与浓度依次为0、25％、50％、75％MSC-CM共培养72h后，各实验组中MMP-7、TIMP-1的分子表达存在明显差异：MMP-7表达的分子水平随MSC-CM浓度增加而逐渐降低；TIMP-1表达的分子水平随MSC-CM浓度增加而逐渐增高。二者分别与空白对照组相比，差别均有统计学意义(P＜0.05)。
结论：
1 测定人脐带血MSC-CM对人胃癌MGC80-3细胞体外生长影响的研究为体内试验提供了理论参考。
2 MSC-CM能明显抑制人胃癌细胞株MGC80-3细胞的体外增殖与转移，且作用效果具有剂量和时间依赖性。
3 MSC-CM可下调MMP-7和上调TIMP-1，这可能是HUCB-MSC抑制胃癌MGC80-3细胞迁移能力的机制之一。