背景：近年来，反义技术广泛地应用于肿瘤基因治疗的研究中，随着基因组学、蛋白组学的研究，已筛选出部分在肿瘤转化、发展过程中的靶基因可作为治疗的靶标。有学者发现，缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)是介导肿瘤细胞缺氧适应的关键性转录调控因子，在多种恶性实体瘤中高表达。HIF-1α可调节多种靶基因如血管内皮生长因子(VEGF)、红细胞生成素(EPO)等的表达，维持肿瘤细胞的能量代谢，影响新血管的生成，促进肿瘤的增殖和转移。血管内皮生长因子(VEGF)在内皮生长及肿瘤发生中具有重要作用，肿瘤的生长和扩散转移与血管生成密切相关。因此，HlF-1α可能是肿瘤基因治疗中一个极具潜力的靶点。 目的：应用HIF-1α反义脱氧寡核苷酸(ASODN)来处理体外培养的宫颈癌Hela细胞，研究反义脱氧寡核苷酸封闭HIF-1α基因对体外宫颈癌Hela细胞生长的抑制作用及对HIF-1α、VEGF表达的影响，力求为今后进行针对HIF-1α的妇科肿瘤基因治疗探寻一条新的可行途径。 方法： 1、对体外培养的宫颈癌Hela细胞进行转染。实验分为HIF-1α反义脱氧寡核苷酸(ASODN)组、HIF-1α正义脱氧寡核苷酸(SODN)组、脂质体对照组及空白对照组。 2、采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法，检测HIF-1α ASODN对体外宫颈癌Hela细胞株增殖的影响。 3、应用间接免疫荧光技术检测ASODN组、SODN组、脂质体对照组及空白对照组细胞HIF-1α和VEGF的表达。 4、逆转录．聚合酶链反应(RT-PCR)检测各组细胞HIF-1α和VEGF mRNA的表达。 5、蛋白印迹(Western blot)技术检测各组细胞HIF-1α和VEGF的蛋白表达，了解HIF-1α基因的沉默效果。 6、所得数据应用SPSS11.5统计分析软件进行分析。 结果： 1、反义脱氧寡核苷酸(ASODN)转染后24h即对宫颈癌Hela细胞发生明显的生长抑制作用，与正义脱氧寡核苷酸(SODN)组、脂质体(LIPOFECTAMINE2000)对照组比较，抑制率差异有统计学意义(P均<0.01)。反义脱氧寡核苷酸(ASODN)对宫颈癌Hela细胞的生长抑制作用呈现剂量依赖性，随药物浓度增加抑制作用增强。 2、RT-PCR及Westem blot结果显示， ASODN处理组细胞HIF-1α及VEGF基因表达与SODN组、脂质体对照组及空白对照组比较，表达量明显降低，差异有统计学意义(P<0.005)。结果表明ASODN特异性抑制了HIF-1α的基因表达。 3、间接免疫荧光技术检测HIF-1α在胞浆及胞核中均着色，而VEGF着色主要分布在胞浆。ASODN处理组细胞HIF-1α及VEGF的荧光强度均明显弱于对照组，说明ASODN对HIF-1α及VEGF的表达有明显的抑制作用。此结果与RT-PCR及Westernblot的分析结果一致，进一步为ASODN对HIF-1α和VEGF的基因表达具有抑制作用提供了实验依据。 结论： 1、HIF-1α在胞浆及胞核中均表达，而VEGF仅在胞浆中表达。 2、脂质体转染HIF-1α ASODN具有明显抑制宫颈癌Hela细胞的增殖活性及下调HIF-1α、VEGF基因表达的作用。 3、HIF-1α ASODN转染可以作为宫颈癌治疗的一种新思路。