Notch2和B-catenin在人恒牙牙髓及牙乳头中的表达

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目的:   在牙齿发育期间,牙乳头间充质细胞分化为成牙本质细胞,形成原发性牙本质;在牙齿萌出后,无论年轻恒牙,还是成熟恒牙,牙髓在受创伤和感染时,牙髓组织中的成牙本质细胞和新分化的成牙本质细胞样细胞就会形成第三期牙本质和修复性牙本质,表明牙髓组织具有较强的自我防御能力和自身修复潜能。关于成牙本质细胞和成牙本质细胞样细胞的分化以及牙本质形成的确切机制还不完全清楚,但目前认为一些生物分子如转录因子、信号分子、生长因子、细胞外基质分子等参与调节牙髓组织中的细胞增殖、分化和基质合成。   Notch2是Notch信号蛋白家族成员,是一种跨膜蛋白,可影响发育过程中多种细胞的分化、增殖和凋亡,在多细胞动物发育的细胞分化中起重要作用,是多种组织和器官早期发育所必需的细胞间调节信号。β连环蛋白(beta-catenin,β-catenin)为细胞骨架蛋白即连环蛋白的家族成员之一,是Wnt信号通路的核心因子,与牙胚发育之间有着密切的关系。目前有关Notch2及β-catenin在年轻恒牙和成熟恒牙牙髓及牙乳头组织中表达的研究鲜有报道。而对这一问题的深入研究和探讨,将有助于我们进一步认识牙髓牙本质复合体的发育、成熟以及年轻恒牙牙髓修复能力的生物学机制。   本实验应用RT-PCR,免疫组化及Western-blot技术检测Notch2和β-catenin在人年轻恒牙和成熟恒牙牙髓及牙乳头组织中的表达,并进行比较以探寻它们在牙髓牙本质复合体发育和成熟中的作用及二者在该过程中是否存在相关性。   材料和方法:   收集51例因正畸或阻生拔除的健康无龋的牙齿,研究对象年龄为11~30岁,均无全身系统性疾病,近三个月未曾服用免疫制剂和抗菌药物。牙齿拔除后立即将年轻恒牙的牙乳头用镊子分离,冻存;然后将牙齿纵向劈开,完整取出牙髓组织,冻存。成熟恒牙直接将牙齿纵向劈开,完整取出牙髓组织,冻存。   按恒牙牙根发育的八个阶段,结合临床和X光片检查,将R2/3,R3/4的年轻恒牙的牙乳头组织归为第1组;将R2/3,R3/4的年轻恒牙的牙髓组织归为第2组;将Ac的成熟恒牙的牙髓组织归为第3组(R2/3代表牙根形成2/3;R3/4代表牙根形成3/4;Ac代表根尖已封闭)。每组各24例,其中12例样本用于RT-PCR检测,12例样本用于Western-blot检测;另外有3例用于免疫组化检测。   对Notch2及β-catenin进行基因水平和蛋白水平的检测,并以β-actin为内参,用图像分析软件分析阳性条带的强度(即灰度值的测定),采用SPSS11.0统计软件包,应用两样本t检验对Notch2和β-catenin在年轻恒牙牙乳头与牙髓组织以及年轻恒牙牙髓与成熟恒牙牙髓组织之间的表达强度进行比较;Spearman相关分析用于Notch2与β-catenin在恒牙牙乳头和牙髓组织中表达强度的相关性分析,检验水准α=0.05,P<0.05为有统计学意义。   结果:   免疫组化染色显示β-catenin和Notch2在年轻恒牙的根尖牙乳头组织、年轻恒牙的牙髓组织和成熟恒牙的牙髓组织中均有不同程度的表达,表达细胞为成纤维细胞、成牙本质细胞、血管内皮细胞;β-catenin在胞核和胞浆中着色,Notch2在胞浆中着色。   RT-PCR和Western-blot实验表明Notch2及β-catenin在年轻恒牙的牙乳头、牙髓和成熟恒牙的牙髓组织中均有表达。二者在年轻恒牙牙髓组织中的表达强于其在年轻恒牙牙乳头组织以及成熟恒牙牙髓组织中的表达,差异具有统计学意义(P<0.05)。而Notch2与β-catenin二者的表达强度之间则无统计学意义上的相关关系(P>0.05)。   结论:   1、无论在mRNA水平,还是在蛋白水平,Notch2和β-catenin在人恒牙的牙乳头和牙髓组织中均有表达。Notch2和β-catenin在年轻恒牙牙髓组织中的表达强度高于年轻恒牙牙乳头组织,也高于成熟恒牙牙髓组织.   2、β-catenin和Notch2在人年轻恒牙的牙乳头、牙髓及成熟恒牙的牙髓组织中的主要表达细胞为成纤维细胞、成牙本质细胞和血管内皮细胞。   3、本研究未发现在恒牙牙根发育过程中Notch2和β-catenin的表达具有统计学意义上的相关关系。
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