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目的通过升主动脉缩窄术建立大鼠肺动脉高压模型,探讨左心疾病相关肺动脉高压形成的病理机制以及Rho A/ROCK信号通路在转录水平的变化及其活性对左心疾病相关肺高压肺血管重构的影响;探讨Rho A/ROCK信号通路与其它血管活性物质(一氧化氮、内皮素-1)之间的作用关系以及ROCK抑制剂法舒地尔对大鼠左心疾病相关肺动脉高压肺血管重构的作用及其机制。方法3-4周龄健康雄性SD大鼠40只,体重90-100g,随机分为对照组(C组:n=10)、升主动脉缩窄组(P组:n=10)、升主动脉缩窄后法舒地尔治疗组(PF组:n=10)、法舒地尔组(F组:n=10)。P组采用升主动脉固定缩窄术建立左心疾病相关大鼠肺动脉高压模型,C组大鼠行假手术处理(钛夹固定于血管旁纵隔组织而非升主动脉,其他所有手术操作同P组),PF组大鼠术后一周开始(F组大鼠于PF组相同时间点),每天给予30mg/Kg法舒地尔腹腔注射,C组、P组在各给药时间点以等容量生理盐水为安慰剂进行腹腔注射,连续注射4周,实验过程中如有大鼠因病重而死亡,则使用相同条件、相同处理的大鼠迅速补位。在建模后60天,对各组大鼠进行血流动力学(右心室收缩压、平均肺动脉压力)检测,于检测血流动力学之前,称量各组大鼠体重并比较;处死大鼠时用PBS行在体心肺灌洗致双肺变白,左肺组织固定于4%多聚甲醛行病理切片以观察肺组织病理形态学变化,使用Image-Pro Plus 6.0对肺小动脉的直径及管壁进行测量,从而计算小动脉中层增厚的程度(肺小动脉管壁厚度与血管直径的比值);取心脏,将右心室(RV)、左心室+室间隔(LV+S)分别称重,计算心室肥厚指数(RV/LV+S);右肺组织液氮速冻之后于—80℃冻存用于RT-PCR法检测基因表达(ROCK m RNA、Rho A m RNA、ET-A受体m RNA、ET-B受体m RNA);处死大鼠前采用眼球取血术每只大鼠保存非抗凝血液5-10ml,留取血清用Elisa试剂盒以检测NO、ET-1浓度,具体步骤根据各自试剂盒说明书进行。结果1.右心室收缩压、平均肺动脉压检测结果以及各组大鼠体重变化情况与C组和F组相比,P组大鼠的右心室收缩压显著升高(26.02±4.10mm Hg、24.35±4.06mm Hg升高至56.48±8.93mm Hg),平均肺动脉压亦显著升高(15.69±2.86mm Hg、15.91±1.68mm Hg升高至28.98±1.82mm Hg),差异均有统计学意义(P<0.01);PF组与P组相比,右心室收缩压显著降低(56.48±8.93mm Hg降低至39.03±1.52mm Hg),平均肺动脉压也显著降低(28.98±1.82mm Hg降低至25.25±0.81mm Hg),差异均有统计学意义(P<0.05)。检测血流动力学之前,各组大鼠称重比较(造模时重量90-100g),结果显示,与C组和F组相比,P组大鼠的体重明显降低(461.50±16.50g、454.38±29.88g降低至393.11±63.01),差异有统计学意义(P<0.01);PF组与P组相比,大鼠体重明显增加(393.11±63.01g升高至443.00±72.75g),差异有统计学意义(P<0.01)。2.肺组织病理学改变以及心室肥厚指数结果比较与C组和F组相比,P组大鼠的肺小动脉中层明显增厚(即肺小动脉管壁厚度与血管直径的比值由0.17±0.04、0.06±0.01升高至0.39±0.07),差异均有统计学意义(P<0.01);PF组与P组相比,小动脉中层明显变薄(即肺小动脉管壁厚度与血管直径的比值由0.39±0.07降低至0.19±0.03),差异有统计学意义(P<0.01)。右心室与左心室+室间隔的湿重之比即为心室肥厚指数(RV/LV+S),结果显示,与C组和F组相比,P组大鼠的RV/LV+S明显减低(0.29±0.04、0.29±0.03降低至0.21±0.03),差异均有统计学意义(P<0.001);PF组与P组相比,心室肥厚指数无明显差别(0.24±0.02与0.21±0.03,P>0.05),而PF组与C组、F组相比,心室肥厚指数明显减低(0.29±0.04、0.29±0.03降低至0.24±0.02),差异有统计学意义(P<0.05)。3.肺组织ROCK m RNA、Rho A m RNA、ET-A受体m RNA、ET-B受体m RNA表达的检测结果与C组和F组相比,P组大鼠肺组织的ROCK m RNA、Rho A m RNA、ET-A受体m RNA的相对表达量均明显增高,差异均有统计学意义(P<0.05),ET-B受体m RNA的相对表达量无明显变化(P>0.05);PF组与P组相比,大鼠肺组织的ROCK m RNA、ET-A受体m RNA的相对表达量明显降低,差异均有统计学意义(P<0.05),Rho A m RNA、ET-B受体m RNA的相对表达量无明显变化(P>0.05)。4.血清中NO、ET-1浓度的检测结果与C组和F组相比,P组大鼠血清NO的浓度明显降低(73.58±12.31μM、57.13±8.04μM降低至38.68±2.80μM),而血清ET-1的浓度明显增高(0.63±0.18pg/ml、0.66±0.22pg/ml升高至2.83±0.25pg/ml),差异均有统计学意义(P<0.01);PF组与P组相比,大鼠血清NO的浓度明显增高(38.68±2.80μM升高至105.22±11.04μM),而血清ET-1的浓度明显降低(2.83±0.25pg/ml降低至1.30±0.23pg/ml),差异均有统计学意义(P<0.01)。结论1.Rho A/ROCK信号通路异常激活在左心疾病相关肺动脉高压发生发展中起着关键作用,且与调控NO、ET-1的表达有关,可能参与了肺小动脉的血管重构。2.ROCK的特异性抑制剂法舒地尔可能通过间接上调NO、下调ET-1而降低升主动脉缩窄致大鼠肺动脉高压大鼠模型的肺循环压力,进而改善肺血管重构。