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目的:构建含人端粒酶逆转录酶(hTERT)核心启动子调控的人钠碘转运体(hNIS)基因重组腺病毒,并靶向转染至肿瘤细胞中特异性表达。探讨hTERT启动子调控的hNIS基因介导放射性碘治疗肿瘤的可能性。方法:(1)从肝癌细胞HepG2基因组DNA中扩增出hTERT核心启动子序列,亚克隆至质粒载体pcDNA3.1(+),通过限制性内切酶酶切和测序鉴定。(2)hTERT核心启动子亚克隆至含全长hNIS cDNA序列的质粒载体FL*-hNIS/pcDNA3,应用限制性内切酶将hTERT-hNIS片段切出后连入穿梭质粒载体pAdTrack,应用Adeasy系统构建出重组腺病毒Ad-hTERT-hNIS。同时,构建CMV启动子调控的hNIS重组腺病毒Ad-CMV-hNIS作为阳性对照,不含hNIS的重组腺病毒Ad-CMV作为阴性对照。(3)应用RT-PCR方法验证hTERT在转染肿瘤细胞中的转录活性,Western blot验证hNIS蛋白的表达,通过摄碘实验检测hNIS蛋白的功能。细胞克隆形成实验评价碘-131对转染肿瘤细胞的毒性作用。结果:(1)成功克隆出hTERT核心启动子,酶切和测序正确。(2)成功构建重组腺病毒Ad-hTERT-hNIS、Ad-CMV-hNIS及Ad-CMV,并经PCR验证正确。(3)RT-PCR证实hNIS cDNA能从Ad-hTERT-hNIS转染的细胞中扩增出来。应用hNIS单克隆抗体行Western blot分析,在55~77kDa之间见到特异性条带。(4)碘摄取实验表明,Ad-hTERT-hNIS和Ad-CMV-hNIS转染的肺癌A549细胞摄碘能力比阴性对照病毒Ad-CMV转染的细胞分别提高了23和31倍,且摄碘能力可以被高氯酸钠抑制。(5)体外克隆形成实验表明,Ad-hTERT-hNIS和Ad-CMV-hNIS转染的肺癌A549细胞分别可以被碘-131杀死约70%和80%,而阴性对照病毒转染组和未转染病毒组仅为10%。结论:本研究成功克隆出hTERT核心启动子,并成功构建重组腺病毒Ad-hTERT-hNIS。Ad-hTERT-hNIS转染肺癌A549细胞可使其获得摄碘能力。证实hNIS基因是很有潜力的治疗基因,转染非甲状腺肿瘤后可以利用碘-131治疗。hTERT启动子调控的hNIS重组腺病毒转染肿瘤细胞后应用碘-131治疗有望成为一种新的基因靶向治疗手段。