【摘 要】
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该实验采用SD大鼠四动脉结扎全脑缺血模型,用免疫沉淀和免疫印迹的方法研究了短暂全脑缺血及复灌对CaMKⅡ的自身磷酸化和转位、SynGAP丝氨酸磷酸化以及CaMK Ⅱ、PSD-95、SynG
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该实验采用SD大鼠四动脉结扎全脑缺血模型,用免疫沉淀和免疫印迹的方法研究了短暂全脑缺血及复灌对CaMKⅡ的自身磷酸化和转位、SynGAP丝氨酸磷酸化以及CaMK Ⅱ、PSD-95、SynGAP三者之间相互作用的影响,同时研究了CaMKⅡ选择性的抑制剂、PSD95反义寡核苷酸等药物对上述作用的影响,从而进一步阐明了全脑缺血海马组织中钙超载及其调节机制.1.大鼠海马中脑缺血诱导的自身磷酸化的CaMK Ⅱ迅速寻靶于SynGAP并使后者发生丝氨酸磷酸化.我们研究了海马中的CaMKⅡ在脑缺血过程中的自身磷酸化及其转位并观察到如下结果:(1)3分钟缺血以后CaMKⅡ迅速发生自身磷酸化同时发生明显的持续的从细胞质部分到细胞膜部分的转位;(2)CaMK Ⅱ在缺血过程中转位到突触后密集区并寻靶于SynGAP,活化的CaMKⅡ催化了SynGAP的丝氨酸残基磷酸化;(3)CaMKⅡ选择性的抑制剂KN62能抑制CaMKⅡ自身磷酸化、SynGAP的丝氨酸磷酸化以及CaMKⅡ和SynGAP的相互结合,但对CaMK Ⅱ的转位没有作用.2.大鼠脑缺血和复灌过程中PSD95能促进CaMK Ⅱ催化SynGAP丝氨酸磷酸化.为了进一步阐明缺血诱导的SynGAP丝氨酸磷酸化的机制,我们研究了缺血和复灌过程中SynGAP丝氨酸磷酸化并探讨了PSD-95在该过程中所起的作用,3.缺血和复灌过程中Raf-1被磷酸化而激活.为进一步阐明SynGAP的丝氨酸磷酸化对MAPK通路的影响,我们研究了在缺血和复灌过程中Raf-1的磷酸化的变化.综上所述,我们的研究发现脑缺血导致自身磷酸化并转位的CaMKⅡ寻靶于胞膜上的SynGAP并催化其丝氨酸磷酸化,而PSD95能促进这一过程的发生.SynGAP发生丝氨酸磷酸化后活性受到抑制,导致激活Ras和Raf-1,进而激活MAPK通路,从而在脑缺血过程中可能起一种保护作用.
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