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蛋白质是细胞中起作用的分子。从mRNA翻译成线性的多肽,要经过正确的折叠和组装过程才能形成具有特定空间结构和生物学功能的蛋白质。因此蛋白质折叠是生命科学领域中的一个基本问题。1960年Anfinsen首先提出了一个重要的理论:“蛋白的一级序列决定了它的高级结构”。这一理论促进了蛋白质折叠在理论和实践方面的进步。本论文包括了两部分工作。第一部分工作研究了猪胰岛素前体体外解折叠路径。猪胰岛素前体体外再折叠路径已经得到了较好的研究,而其解折叠路径却尚未被报道,所以通过改变解折叠条件来研究其解折叠路径。主要从两个方面改变试验条件:一是选择一个合适的氧化还原体系,而不用之前的含有变性剂的体系;二是我们降低了反应体系的温度,使中间体之间的转化速度降低,从而可以捕获到更多的中间体。这部分工作主要受到二硫键稳定性实验的启发,在低温条件下含二硫键的蛋白质在适当的氧化还原体系中反应后,蛋白质的天然状态会经过一些中间体形式逐渐转变为完全还原状态。因为体系所用的是0℃,所以在这样的条件下就会使二硫键之间的交换和二硫键/巯基之问的反应变慢,就可以捕获到更多的中间体。通过对不同氧化还原体系下中间体含量的比较,我们选用的反应体系[GSH/GSSG]的比值为40/1,PIP以0.15mg/ml的浓度溶于该体系中0℃反应16小时。用HPLC分离纯化在这样的体系下P1P的不同中间体形式。本试验中我们捕获并用质谱鉴定了6个中间体,其中有4个中间体含有两对二硫键,另外2个中间体含有一对二硫键。通过分析这些中间体的二硫键连接方式,我们推出了猪胰岛素前体的解折叠路径,同时通过比较解折叠中间体与再折叠中间体,我们发现它们含有相同的中间体。因为捕获到的解折叠中间体比再折叠中间体要多,所以通过对猪胰岛素前体的体外再折叠的研究,可以补充它的再折叠途径。通过对猪胰岛素前体解折叠途径与再折叠途径的比较,再次证明了胰岛素家族的体外折叠/解折叠通过类似但相反的途径。本论文第二部分工作研究了猪胰岛素前体不同的氨基酸位点对它折叠的影响。分别突变猪胰岛素前体B链的第10和16位氨基酸,得到了两个突变体[B10D]PIP和[B16A]PIP。通过对它们的CD分析,二硫键稳定性分析及体外再折叠产率和速率的研究发现:如果蛋白质的结构和二硫键的稳定性高,它的体外再折叠产率和速率也大;反之也成立。因此推测蛋白质的结构稳定性与它的体外再折叠可能存在一定的相关性,但是仍需更多试验来证明。