目的：　　(1)初步探讨HBV X基因准种群及突变位点的动态变化与肝癌进程之间的关系;　　(2)揭示准种群的遗传进化规律;　　(3)比较二代测序和克隆测序两种方法检测HBV X基因准种变异特征的优劣。　　方法：　　(1)通过文献检索和使用引物设计软件，找到适合扩增HBV DNAX基因区的PCR引物，验证引物的敏感性和特异性，选择最优化的方法扩增目的片段。　　(2)在广西肝癌高危人群队列中选择最终发展成肝癌的病例(A)和无癌的对照(B)各1例作为本研究的研究对象。自研究对象进入队列起，病例A每半年一次采集其外周血5ml，3000rmp/min离心，分离血清置-80℃冰箱保存备用，直至其肝癌发病;对照B每一年一次采集其外周血5ml，3000rmp/min离心，分离血清置-80℃冰箱保存备用。共收集到2例研究对象血清共12份。提取血清HBV DNA并采用巢式PCR的方法扩增HBVX区。PCR产物同时采用NGS和CBS两种方法检测HBVX区准种。　　(3)对获得的序列进行生物信息学处理，计算准种复杂性和多样性指标;对两种方法获得的合格准种株数和准种复杂度进行比较;HBV准种随病程的遗传变异用系统进化树进行分析。　　结果：　　NGS方法获得的准种序列9348条，远大于CBS方法获得的准种株数量98个。NGS共检测到HBV X基因的40个变异位点和1段插入突变(nt1649)，CBS共检测到41个变异位点和2段插入突变nt（1672-1673）和nt(1654-1655)。两种方法同时检测到的变异位点有29个，NGS检测到而CBS未检测到的变异位点有11个，NGS未检测到而CBS检测到的变异位点有12个。与肝癌病变发病相关的HBV X基因突变位点有A1762T/G1764A双突变、C1773T、C1653T、T1753G和T1768A。将NGS和CBS两种方法所得的HBV X区准种复杂度值进行比较发现，在核苷酸水平上，NGS方法获得的HBV X区准种复杂度值均高于由CBS方法获得的值(t=4.20，P＜0.05)。两种方法所得数据分别计算平均遗传距离d，经比较发现，NGS方法获得的d值＜CBS(t=-7.33，P＜0.001)。　　结论：　　(1)发现了与肝癌发病相关的HBV X基因突变位点，可用于HBV相关肝癌高危对象的确定，优化肝癌的早期筛查方案。　　(2)本研究证实了HBV X基因准种的存在并能影响肝癌的病程进展，准种及其优势株在肝癌发病前2-3年的变化趋势更为显著，发病前1-1.5年准种变化趋于平稳。　　(3)在研究HBV碱基变异方面，CBS和NGS发现SNP的能力相当，CBS发现长片段插入和缺失的能力优于NGS。在准种研究方面:a.技术上NGS具有高通量、省时省力等优势，适合大样本检测，但检测分析费用昂贵;而CBS实验步骤繁琐，费时费力，但实验成本低廉;b.结果分析方面，NGS得到的数据量大，需要专业的分析平台及软件进行数据处理;而CBS结果处理简单易行;c.检测能力方面，CBS获得的合格准种株受克隆数目的限制而较少;NGS由于具有高通量的特点，因此获得的合格准种株远多于CBS。